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《試論bacillus subtilis wshdz-01產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的提取、純化及性質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、江南大學(xué)碩士學(xué)位論文BacillussubtilisWSHDZ-01產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的提取、純化及性質(zhì)研究姓名：姚海勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：環(huán)境工程指導(dǎo)教師：華兆哲;陳堅(jiān)20080601攢要摘要過(guò)氧化氫酶(Catalase，簡(jiǎn)稱(chēng)CAT)，能夠催化H202分解為H20和02，被廣泛用于食品消毒、臨床分析、醫(yī)學(xué)診斷以及紡織、造紙、制漿等工業(yè)。隨著環(huán)保意識(shí)鰓加強(qiáng)，在紡織染整工藝中采用酶替代傳統(tǒng)的強(qiáng)堿高溫工藝對(duì)棉織物進(jìn)行前處理已得到了廣泛的應(yīng)用。過(guò)氧化氫酶在棉織物前處理過(guò)程中的主要作用是去除織物漂白廢液中殘余的H202，以消除對(duì)后續(xù)染色工序的影響。本論文研究了BacillussubtilisWSH
2、DZ．01胞肉過(guò)氧化氫酶的純學(xué)提取、純俄方法及其酶學(xué)性質(zhì)，并通過(guò)添加各種穩(wěn)定劑增強(qiáng)過(guò)氧化氫酶應(yīng)用的穩(wěn)定性。主要研究結(jié)果如下：(1)采用氯仿沖擊法來(lái)釋放BacillussubtilisWSHDZ。01胞內(nèi)CAT，在37℃條件下20皿氯仿處理0．01gDCW菌體30rain，在水溶液中滲透60rain后釋放CAT的酶活，可以達(dá)到超聲波破碎的85％以上。(2)粗酶液經(jīng)乙醇分級(jí)沉淀、DEAE齲離子交換層析柱、疏水層析柱后，所縟過(guò)氧化氫酶樣品的比酶活由1982．4U／mg提高到了13563．8U／mg，純化倍數(shù)為6．8，回收率達(dá)到32．5％。該過(guò)氧化氫酶的亞基分子量為63kD，在405nl／1處顯
3、示特征吸收峰(Soretband)，推測(cè)含有血紅素。計(jì)算獲得酶的表觀米氏常數(shù)為26。87mmolL忍。該過(guò)氧化氫酶不受低亞硫酸鈉的還原作用影響，毽被氰化物、疊氮詫物和3．氨基．1，2，4．三唑(單功能過(guò)氧化氫酶的專(zhuān)一抑制劑)強(qiáng)烈抑制。以鄰苯二胺作為電子供體測(cè)定酶活時(shí)，該酶不顯示過(guò)氧化物酶活性，因此，將該過(guò)氧化氫酶定性為單功能過(guò)氧化氫酶。(3)BacillussubtilisWSHDZ一01所產(chǎn)CAT在pH5—10的范圍內(nèi)催化活性基本上不受pH的影響，最適pH為12，并且在pH6．11的范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，25℃條件下放置60rain后基本沒(méi)有酶活損失。最適酶促反應(yīng)溫度為55℃；酶的
4、熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，該酶在50℃以下相擻穩(wěn)定，保溫60min后的酶活基本保持不變。(4)研究了在BacillUSsubtilisWSHDZ．01所產(chǎn)CAT中添加糖類(lèi)、多羥基醇類(lèi)、金屬離子、陰離子和其他～些化學(xué)物質(zhì)對(duì)酶應(yīng)用穩(wěn)定性的影響，在添加500IIllTIO兒乙酸鈉、500mlTlO比硫酸鈉和50％乙二醇和聚乙二醇后，都可以將酶液在60℃下保溫15min后的殘余酶活提高至80％以上。(5)而通過(guò)在各溫度下對(duì)BacillussubtilisWSHDZ．01所產(chǎn)CAT失活過(guò)程的研究發(fā)現(xiàn)，原酶的熱失活過(guò)程更符合一級(jí)失活模型，而在添加乙酸鈉和硫酸鈉后的該酶的失活過(guò)程則符合二級(jí)失活模型。通過(guò)熱力學(xué)
5、性質(zhì)研究，珂以發(fā)現(xiàn)器酶不僅在相對(duì)高溫條件下穩(wěn)定性較差，并且其穩(wěn)定性隨著溫度改變而變化較大，而添加兩種穩(wěn)定劑后，則很大程度上可以提高酶在高溫條件下的熱穩(wěn)定性。關(guān)鍵詞：過(guò)氧化氫酶、提取、純化、酶學(xué)性質(zhì)、熱穩(wěn)定性A墨i
6、j；’
7、RAC’l‘ABSTRACTCatalaseCalldecomposeHE02intoH20and02effectively．PhysiologicallyitactsasaregulatorofH2：02levelsinorganellesandprotectorganismfromthedamageofreactiveoxygenspecies．Catalasesf
8、romvarioussourcesareutilizedinseveralapplications，suchasdiseasesdiagnosisandremovalofhydrogenperoxideinfoodsterilization．Catalaseisusedinremovalofhydrogenperoxideinthetextilepretreatmentasasubstituteforhigh-temperaturewaterwashingandusingchemicalreducingagents．Inthisstudy,weinvestigatedthemethods
9、forextraction，purificationandcharacterizationofacatalasefromBacillussubtilisWSHDZ-O1。Andbeintendedtoimprovethethermostabilityofthecatalsebyusingadditives．Themainresultsweregivenasfollows：(1)弧eBacillussubtilisWSHDZ—01ce
