農(nóng)桿菌介導(dǎo)的雙價抗蟲基因PtaCrylAc番茄的遺傳轉(zhuǎn)化研究

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1、吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的雙價抗蟲基因Pta-CrylAc番茄的遺傳轉(zhuǎn)化研究姓名：楊俊杰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：宋述堯20060401農(nóng)稈菌介導(dǎo)的雙價抗蟲纂因pta—GrylAc番茄的遺傳轉(zhuǎn)化研究摘要本研究優(yōu)化了番jI枉的再生體系和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄轉(zhuǎn)化體系，并構(gòu)建了應(yīng)用于農(nóng)枵螢余囂法籍健戇雙馀揀蟲載俸西勰BI矗3s00咱t—pta，跌蠶蘩黠系澈cro一善。魏蕘謄孝粒進行了菊茄轉(zhuǎn)純、轉(zhuǎn)化番茄的分子嫩物學(xué)鑒定以及遺傳學(xué)分析，并初步進行了轉(zhuǎn)基因番茄的抗斑鑒定工作，主要結(jié)果如下

2、：l優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)番茄轉(zhuǎn)化的幾個影響因素；①外檀體長度在5硼左右有利于愈痿縫綾的影或；⑦斃照培養(yǎng)濺麓培養(yǎng)受有秘予愈痿組織翡形成；③農(nóng)輯藹鏝染時間為8—10分鐘；④菌液濃度O隗。約為O．15；⑤侵染液pH=5．2；@乙酰丁香酮使用濃度為50∥Ⅲ01／L：⑦共培養(yǎng)時間為三天時獲得了最高的轉(zhuǎn)化效率；⑧選靂羧芐毒霉素必耱菌裁，濃發(fā)淹300瓔g／l；◎戩弦l傳為選擇裁辯戇濃度秀4mg／l。2以pcAMBIA3300為骨架，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了含半夏凝集素和蘇云金芽孢桿菌的雙價抗蟲載體，并以根癌農(nóng)桿菌LBAl

3、100為侵染蘸轉(zhuǎn)化番茄。并且，轉(zhuǎn)化后從325個終毽髂菝褥再生獯稱24椿，再叟攀為8。5篙。3對轉(zhuǎn)化的24株再擻植株中進行了PcR檢測、R卜PcR檢測以及Southernblot檢測，并且確定陽性植株為15株，轉(zhuǎn)化率為62．5％。4對彳，援掾送孬了摭斑基霆＆弼庇分離分輯，縫暴簿會孟德承痰律，掰鑲霹蕊蛙之比為3；l；并且抗斑基因。弼d口和抗蟲基因戶船共分離。5對T。械株進行了除萆劑抗性檢測，抗除草劑銷效成分PPT譙20mg／l。6對Tl代植株B卜l一8P-7進行了小菜蛾幼蟲視步抗性鑒寇，抗蟲性程度較

4、為顯著，毽不閼襤辣差異較大。關(guān)鍵詞：鬻茄，cryIAc，Pta，根绱農(nóng)桿菌，遺傳轉(zhuǎn)化，抗蟲VIT量legene鼉ict耀nsfor撖ationOfpta—CrylAcintomaloVia4刪西國刪切口i棚一ⅫnediationAbstr巍ctAne獺ciontregenera娃onsystem越d蠢緲幻趺r洳削咐鯽婦耐艦nsgen{esystemwasestablished訊tol瑚主o．Apian

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