旱冬瓜遺傳多樣性的RAPD分析

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1、摘要:遺傳多樣性是林木遺傳育種的物質(zhì)基礎。但是,傳統(tǒng)林術(shù)遺傳育種主要考慮遺傳增益。而忽視了林木遺傳多樣性問題,導致了一些嚴重問題的出現(xiàn)。現(xiàn)在,林木育種學家已經(jīng)意識到,長期育種應以維持育種群體遺傳變異為主要目的,以物種生物學、群體遺傳學和居群生態(tài)學為理論基礎。早冬瓜(Alnusnepaler,sisD.Don)是云南省重要的造林、用材樹種,但是林分退化相當嚴重,影響了該樹種的利用價值。因此對其進行遺傳改良非常必要。本論文運用RAPD標記技術(shù)對旱冬瓜種群遺傳多樣性進行研究,希望可以為該樹種的遺傳改良策略定制提供科學的依據(jù)。主要結(jié)論如下:(1)利用CrAB法成功抽提出符

2、合實驗要求的DNA樣品。(2)建立了旱冬瓜RAPD分析技術(shù)體系:25ul反應體系中,含lxBuffer,1.9mM/LMgCl2,n3pM隨機5

3、物,0.25mM/LDNTPs,1.25UTaq,20ngDNA摸板。反應程序為:94℃預變性4min,然后執(zhí)行40個擴增循壞,每個循環(huán)中,94。C變性40s,36℃退火40s,72℃延伸1rain。最后72℃延伸10mla。(3)采用16個引物對分布于云南省的4個早冬瓜群體共60個個體進行了RAPD擴增和分析,得出物種水平的多態(tài)條帶百分率(PPB)為52.舛%,Nei的基因多樣度(Ht)為O.1268。分子方差分析(A

4、MOVA)表明。在總遺傳變異中,群體內(nèi)遺傳變異占96.91%;POPGENE給出的基因分化系數(shù)(Gst)為0.0751:物種的遺傳變異主要存在于群體內(nèi)。(4)早冬瓜屬風媒植物,借助風力可將花粉傳送到很遠的距離。因此,備群體之聞存在頻繁的基因交流,這是群體之問盼遺傳差異非常小(3.09%,AMOVA;7.51%,POPGENE)的最重要原因。另外,如果在試驗取樣過程中再合理些,可能會使試驗結(jié)果更糖確。關鍵詞:旱冬瓜,遺傳多樣性,遺傳結(jié)構(gòu),遺傳變異,RAPDAbstract:Geneticdiversityisthesubstantialbasisoftreebree

5、ding.However,thetleebreedersusedtopaymoreattentiontogeneticgainintraditionaltreebreedingandignoretheroleofgeneticdiversity,thisledsomeseriousproblem.Now,theyaremoreandmoreawarethatlongtermbreedingshouldaimatmaintaininggeneticvariationofforestpopulations.ThepropeRyanddevelopingtendency

6、offorestpopulationsshouldbestudiedmainly.A/nusnepalensisD.DonisoneofthemostimportantafforestationspeciesinYunnenprovince.Buttheseriousdegradationofthepopulationshavestronglyreduceditsvalueinuse.So.itisnecessarytodosomeworkonthegeneticimprovementofthespecies.Togivesomescientificfoundat

7、ionsforthemakingofgeneticimprovementstrategy,theauthorstudiedthegeneticdiversityofA/nusnepalensisD.DonthroughRAPDmolecularmarker.Theresultsasfollowing:(1)TheDNAextracfionandpurificationofA/nusnepalensisD.DonhasbeenmadesuccessfullybymeansofimprovedCTAB.(2)ThereliableRAPDanalysissystemw

8、asestablished.Thereactionvelumis25u1.Reactionmixtureconsistwith20ngDNA,0.25uM,LofesehdNTPs。1。9mM/LMgCt2,0.3pMrandomprimerand1.25UTaqpolymerase.RAPDprogramis:4rainat94℃forpredenaturation;then40cycleof40sat94℃fordenaturation,40sat36"Cforannealing,60sat72℃forextension;finallyextensionat7

9、2℃for

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