非水毛細(xì)管電泳法測(cè)定山楂果實(shí)中的綠原酸和咖啡酸

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1、http://www.paper.edu.cn非水毛細(xì)管電泳法測(cè)定山楂果實(shí)中的綠原酸和咖啡酸禹凱，朱金花，陳興國(guó)蘭州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，蘭州（730000）E-mail：chenxg@lzu.edu.cn(X.Chen)，yuk05@lzu.cn摘要：本文建立了分離和測(cè)定山楂果實(shí)中綠原酸和咖啡酸的非水毛細(xì)管電泳方法。分離介質(zhì)（緩沖液）為：35mMTris-0.7%醋酸的甲醇溶液，分離電壓為-25kV。在此最佳條件下，兩種分析物可在10min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離。兩種分析物的線性范圍為20-200μg/ml，連續(xù)運(yùn)行5次的遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(R.S.D.)分別為：2.8

2、2%和2.29%(日內(nèi))；4.02%和3.14%(日間)。樣品中分別加入25，50，100μg/mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得綠原酸的回收率為98.7%、98.2%和97.5%；加入25，50，100μg/mL咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得咖啡酸的回收率為95.6%、102.5%和99.4%。此方法簡(jiǎn)單、快速，具有比較好的精密度、回收率和線性關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)的方法也可應(yīng)用于測(cè)定植物中的其他有機(jī)酸成分。關(guān)鍵詞：綠原酸，咖啡酸，有機(jī)酸，非水毛細(xì)管電泳1.前言山楂，又叫“山里紅”、“胭脂果”，它具有很高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值。山楂含多種維生素、綠原酸、咖啡酸、酒石酸、檸檬酸、山楂酸、齊菊果酸等，還含有黃酮類

3、、內(nèi)酯、糖類、蛋白質(zhì)、脂肪和鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)。由于山楂含山楂酸等多種有機(jī)酸，味酸甘，并含解脂酶，入胃后，能增強(qiáng)酶的作用，促進(jìn)肉食消化，有助于膽固醇轉(zhuǎn)化。所含的解脂酶能促進(jìn)脂肪類食物的消化，促進(jìn)胃液分泌和增加胃內(nèi)酶素等功能。中醫(yī)認(rèn)為，山楂具有消積化滯、收斂止痢、活血化淤等功效。主治飲食積滯、胸膈痞滿、疝氣血淤閉經(jīng)等癥。山楂中含有萜類及黃酮類等藥物成分，具有顯著的擴(kuò)張血管及降壓作用，有增強(qiáng)心肌、抗心律不齊、調(diào)節(jié)血脂及膽固醇含量的功能[1-3]。綠原酸(chlorogenicacid)化學(xué)名稱為3-咖啡酰奎尼酸，分子式為C16H18O9。綠原酸具有抗菌、消炎、解毒、利膽、降壓

4、和升高白細(xì)胞及顯著增加胃腸蠕動(dòng)和促進(jìn)胃液分泌等藥理作用，對(duì)大腸桿菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有較強(qiáng)的抑制作用；對(duì)急性咽喉炎癥和皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細(xì)菌性感染疾病及放化療時(shí)所致的白細(xì)胞減少癥，對(duì)月經(jīng)過多，子宮功能性出血有良好的止血效果[4]?？Х人?caffeicacid)分子式C9H8O4，具有廣泛的抑菌作用[5-7]。液相色譜、毛細(xì)管電泳已經(jīng)用于測(cè)定山楂中的成分[24-36][8-20]。雖然液相色譜是一項(xiàng)成熟的技術(shù)具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的純化和制備，但仍存在分析時(shí)間較長(zhǎng)、消耗樣品和溶劑多、柱子易污染等缺點(diǎn)。毛細(xì)管電泳(capi

5、llaryelectrophoresis，CE)是近年來(lái)發(fā)展迅速的一項(xiàng)分析技術(shù)，具有分析效率高、分析速度快、樣品用量小和運(yùn)行費(fèi)用低的特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種復(fù)雜體系的分離分析。分離成分主要包括生物堿、黃酮、苷類、有機(jī)酸、香豆素、木脂類、醌類[21-23]。CE的分離通常是在水溶液中完成的，這限制了分析物的使用范圍。為拓寬毛細(xì)管電泳的分析范圍，可在分離介質(zhì)中加入表面活性劑等來(lái)加以調(diào)節(jié)，但仍要求被分析物在水中具有足夠的溶解度。對(duì)在水溶液中溶解度很小的被分析物，通常在毛細(xì)管壁上的吸附也非常明顯，且-1-http://www.paper.edu.cn用來(lái)調(diào)整分離條件的實(shí)驗(yàn)參數(shù)有一

6、定的局限性。直到1994年，Sahota和Khaledi[24]報(bào)道了用甲醇和N-甲基甲酰胺作分離介質(zhì)，對(duì)比研究了非水與水毛細(xì)管電泳在效率、分離時(shí)間和選擇性的不同。與此同時(shí)，Ng和Tomlinson研究組報(bào)道了非水毛細(xì)管電泳(NACE)的實(shí)際應(yīng)用[25-27]。自此以后，非水毛細(xì)管電泳引起了人們注意并得到了廣泛應(yīng)用，已成功應(yīng)用于藥物與其代謝物、蛋白質(zhì)、肽類、手性化合物、脂肪酸、表面活性劑以及有機(jī)離子和無(wú)機(jī)離子等的分離[28-33]。利用有機(jī)溶劑物理化學(xué)性質(zhì)上的不同特性，用其作為NACE分離介質(zhì)具有多方面的優(yōu)勢(shì)：(1)對(duì)在水溶液中難溶而不能用CE分離的對(duì)象，在有機(jī)介質(zhì)中有較

7、高的溶解度而實(shí)現(xiàn)CE分離，拓寬了分析范圍，如不溶于水的多環(huán)芳烴也能利用NACE進(jìn)行分析[34]；(2)NACE能改善分離度，增加選擇性。在非水條件下，溶質(zhì)的溶劑化、離子對(duì)效應(yīng)和復(fù)合物的形成與水相中有很大的不同，在水介質(zhì)中遷移速度相近的溶質(zhì)在非水介質(zhì)中的遷移時(shí)間能發(fā)生改變，甚至完全改變分離順序，因而使在水介質(zhì)中難以分離的物質(zhì)分離度增加，可更好地選擇性測(cè)定[35]；(3)NACE增多了可優(yōu)化參數(shù)的個(gè)數(shù)，如非水介質(zhì)的極性、介電常數(shù)、粘度等。故僅通過簡(jiǎn)單地調(diào)節(jié)背景電解質(zhì)的構(gòu)成，許多分離參數(shù)，比如分辨率、分離時(shí)間、選擇性就能得到輕微甚至