響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取杭白菊黃酮工藝條件探究

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1、響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取杭白菊黃酮工藝條件探究（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州310053）□□摘要：利用響應(yīng)面法對超聲提取杭白菊中黃酮類成分的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化。在對乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間、提取溫度等單因子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)中心組和設(shè)計(jì)原理，采用四因子三水平的響應(yīng)面分析法，得岀了超聲提取黃酮的最佳工藝條件?？陉P(guān)鍵詞：響應(yīng)面法；杭白菊；黃酮口中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào):1673-2197（2009）03-0020-03□□杭白菊為多年生草本菊科植物菊（CyrysanthemumMorifoliumRamat）的頭狀花序。古人吳瑞謂："花大而香者為甘菊，花小而黃者

2、為黃菊，花小而氣惡者為野菊?！背Ｓ玫木栈ㄆ贩N根據(jù)地理?xiàng)l件分有亳菊（安徽亳縣）、滁菊（安徽滁縣）、杭白菊（主產(chǎn)浙江桐鄉(xiāng)、海寧，因主要集散地為杭州而得名，為浙八味之一）、懷菊（河南泌陽）等。杭白菊性辛、甘、苦，微寒；歸肺、肝經(jīng)。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，菊花具有散風(fēng)清熱、平肝明目的功效，可用于風(fēng)熱感冒、發(fā)熱頭痛、目赤昏花、眩暈驚風(fēng)、疔瘡腫毒?，F(xiàn)代研究證明杭白菊含揮發(fā)油、黃酮及多種維生素和微量元素。其中，杭白菊黃酮類化合物（刺槐昔、大波斯菊昔、木犀草?7■葡萄糖昔、香葉木素?7■葡萄糖昔、菊昔）可保護(hù)心血管、清除自由基等。因此，優(yōu)化黃酮類化合物的提取條件具有重要意義。口響應(yīng)面分析法（R

3、SM,ResponseSurfaceMethod）采用多元二次回歸的方法，將多因子實(shí)驗(yàn)中因子指標(biāo)的相互關(guān)系用多項(xiàng)式近似擬合，通過對函數(shù)響應(yīng)面和等高線的分析，能夠精確地研究各因子與響應(yīng)［6］值之間的關(guān)系。響應(yīng)面分析法能夠以最經(jīng)濟(jì)的方式對所選實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行全面的分析和研究，已越來越多地應(yīng)用于各種生物化工處理過程的優(yōu)化。本文以黃酮的提取率為指標(biāo)，應(yīng)用響應(yīng)面法對苦瓜皂昔的超聲提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到了黃酮的最佳提取工藝。1儀器與材料口1.1實(shí)驗(yàn)儀器口FAX04型電子天平（上海儀器廠）,UV-2600紫外可見分光光度計(jì)（惠普上海分析儀器有限公司），循環(huán)水式真空泵?？?.2實(shí)驗(yàn)材料

4、口杭白菊采于浙江杭州，經(jīng)本院資源鑒定教研室姚振生教授鑒定為CyrysanthemumMorifoliumRamato蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：080-9002）o硫酸、苯酚、乙醇等試劑均為分析純?？?實(shí)驗(yàn)方法口2.1黃酮的提取口準(zhǔn)確稱取杭白菊1.0g,置于100mL圓底燒瓶中，加入一定量乙醇溶液，在一定的溫度、一定功料液比，提取一定的時(shí)間，取岀過濾，濾液離心除雜，上清液減壓濃縮，即得皂昔粗提液?？?.2黃酮標(biāo)準(zhǔn)液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作口精密稱取經(jīng)120°C干燥至恒重的蘆丁對照品9.15mg,置50mL量瓶中，加50%乙醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品

5、液（0.183mg/mL卜□準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.5,1,2,3,4,5mL,置25mL容量瓶中，加50%乙醇至6mL,加5%NaNOQ21.0mL,放置6min，加10%Al(NOO3)n31.0mL,^86min，加10%NaOH10mL,加50%乙醇至刻度，搖勻，放置15min,以相應(yīng)試劑作空白，509nm波長處測定吸光度。用最小二乘法作線性回歸得濃度C與吸光度A的關(guān)系曲線回歸方程式為:A=0.7716C+0.0676,R2=0.9999o□2.3黃酮提取率的計(jì)算口吸取一定體積的杭白菊提取液，置于試管中，按2.2項(xiàng)方法操作，測定吸光度，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算岀黃酮質(zhì)量，并按下

6、述公式計(jì)算黃酮提取率：口黃酮提取率（%）二提取的黃酮質(zhì)量/杭白菊粉質(zhì)量xioo%n3結(jié)果分析口采用SAS9.13軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多項(xiàng)式擬合回歸，以吸光度（Y）為因變量，乙醇濃度（XLMX料液比（XLJ2、提取溫度（XQ3X提取時(shí)間（XD4）為自變量，建立回歸方程如下：口Y=-20.3402+160.3279XD1+0.241104Xn2-0.376771XD3-9.714958Xn4-126.5104XniXni-0.286125XniXD2+0.01275XniXn3+3.97875XniXQ4-0.000138Xn2Xn2+0.001048Xn2XD3-0.0033

7、62Xn2Xn4+0.002217Xn3X□3+0.078981Xn3Xn4+0.304052Xn4Xn4n回歸方程可信度分析見表3,其中R2=87.96,表明87.96%的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用該模型進(jìn)行解釋，說明方程可靠性較高。CV值越低，顯示實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性越好，本實(shí)驗(yàn)中CV值為17.27946%,較低，說明實(shí)驗(yàn)操作可信。綜上所述，該回歸方程為優(yōu)化超聲提取黃酮的工藝條件提供了一個(gè)良好的模型?？诓捎肧AS9.13程序?qū)υ囼?yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，分析結(jié)果見表4。表4中的Tr>Fn項(xiàng)表示大于F值的概率，從中可以看出XO2料液比和XO3*Xn4對丫