(精選)沙門菌檢查

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1、1.簡(jiǎn)沙門屈是腸桿菌科的重要致病菌，藥品中的沙門菌，是以鑒定沙門菌屈為準(zhǔn)，即對(duì)每10g（或10ml）藥品中是否檢岀沙門菌作岀檢驗(yàn)報(bào)告。由于藥品在生產(chǎn)過程屮，常受到加熱、干燥等加工步驟的影響，藥品屮污染的沙門菌受到損傷或呈休眠狀態(tài)，故須在增菌培養(yǎng)前先進(jìn)行預(yù)增菌。然后再進(jìn)行增菌及分離、三糖鐵瓊脂初步鑒別、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)等步驟。2.儀器、設(shè)備及用具（參見大腸埃希菌2）。3.試液、指示液（參見大腸埃希菌3）。3.1無(wú)菌腺試液。3.2酚磺瞅指示液。3.3亮綠試液。3.4氤化鉀試液3.5混甲酚紫指示液3.6革蘭染色液4.培

2、養(yǎng)基4」?fàn)I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。4.2營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。4.3半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。4.4曙紅亞叩藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）。4.5麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacC）。4.6四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）。4.7三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）。4.8膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL）o4.9沙門菌屈志賀菌屈瓊脂培養(yǎng)基（SS）o4.10蛋白Jj東水培養(yǎng)基。4.11腺（尿素）瓊脂培養(yǎng)基。4.12M化鉀培養(yǎng)基。4.13賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基。5.對(duì)照用菌液取乙型副傷寒沙門菌［CMCC(B)50094］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物少許，接種至5ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，

3、36°C±1°C培養(yǎng)18?24h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至1:106(濃度相當(dāng)于50?lOOcfu/O.lml),作陽(yáng)性對(duì)照用菌液。其菌液濃度可用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)得。即取O.lml加入平川L內(nèi)，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂，混勻，或以0.1ml均勻涂布于事先準(zhǔn)備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，經(jīng)培養(yǎng)后點(diǎn)計(jì)求得。2.操作方法6.1準(zhǔn)備工作：(見細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)6)。6.2供試液的制備：(見細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)7)。6.3陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)、陰性對(duì)照試驗(yàn)(見大腸埃希菌7.1)。6.4增菌培養(yǎng)641預(yù)增菌取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基2份，每份200ml

4、,1份加入10g或者10ml供試品混勻，另1份加入稀釋劑10ml作陰性對(duì)照，36°C±1°C培養(yǎng)18?24h,觀察。搖動(dòng)陰性對(duì)照瓶后應(yīng)清亮透明，無(wú)菌生長(zhǎng)。6.4.2增菌培養(yǎng)輕微搖動(dòng)供試品增菌培養(yǎng)瓶，吸取1ml接種于1管含10ml四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基的試管中，培養(yǎng)18?24h。6.5分離培養(yǎng)輕微搖動(dòng)供試品增菌培養(yǎng)瓶，以接種環(huán)沾取1?2環(huán)培養(yǎng)液劃線于膽鹽硫乳瓊脂(DHL)或沙門菌志賀菌瓊脂(SS)平板及曙紅亞甲藍(lán)(EMB)瓊脂或麥康凱瓊脂平板各1個(gè)，倒置培養(yǎng)24?48h,必要時(shí)延長(zhǎng)至40?48h。檢查平板上有無(wú)疑似沙門菌

5、菌落。沙門菌在上述平板上的菌落形態(tài)見下表沙門菌的菌落特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)膽鹽硫乳瓊脂(DHL)無(wú)色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無(wú)黑色。沙門菌屬志賀菌屬瓊脂(SS)無(wú)色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有吋帶黑褐色。曙紅亞甲藍(lán)瓊脂(EMB)無(wú)色至淺橙色，半透明或透明，光滑濕潤(rùn)的圓形菌落。麥康凱瓊脂(MacC)無(wú)色至淺橙色，半透明或透明，菌落屮心有時(shí)為暗色。6.6初步鑒別試驗(yàn)從每個(gè)供試品的分離平板上挑取2?3個(gè)疑似菌落分別接種于三糧鐵瓊脂斜面，接種時(shí)應(yīng)以接針輕輕接觸單個(gè)菌落屮心部位，沾取培養(yǎng)物劃線于三糖鐵瓊

6、脂斜面并穿刺到底層或先穿刺底層再劃線斜面，培養(yǎng)18?24h,觀察結(jié)果。疑似沙門菌在三糖鐵瓊脂斜面上的反應(yīng)為：（1）斜面紅色（產(chǎn)堿），底層黑色（產(chǎn)H2S）并顯示黃色（產(chǎn)酸）。（2）斜面紅色，底層黃色。（3）斜面黃色，底層黑色，并顯示黃色。多數(shù)沙門菌在三糖鐵瓊脂上產(chǎn)生氣體，使底層瓊脂出現(xiàn)氣泡或使瓊脂斷裂，但也有不產(chǎn)生氣體的菌種。對(duì)在三糖鐵瓊脂斜面黃色并同時(shí)底層無(wú)黑色，或斜面及底層均為紅色者可以排除沙門菌。將疑似沙門菌的三糖鐵瓊脂或營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作生化試驗(yàn)，血清凝集試驗(yàn)及革蘭染色，鏡檢。沙門菌應(yīng)為革蘭陰性桿菌。6.7生

7、化試驗(yàn)6.7」靛基質(zhì)試驗(yàn)用接種壞沾取少許培養(yǎng)物，接種于蛋門腺水培養(yǎng)基中，照大腸埃希菌靛基質(zhì)試驗(yàn)項(xiàng)下操作、判斷結(jié)果。沙門菌應(yīng)為陰性反應(yīng)。6.7.2W酶試驗(yàn)用接種壞沾取少許培養(yǎng)物，劃線接種于腺瓊脂斜面，培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。斜面變?yōu)榧t色為陽(yáng)性反應(yīng)，沙門菌屬為陰性反應(yīng)。6.7.3M化鉀試驗(yàn)將培養(yǎng)物先接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)20?24h,用接種環(huán)沾取培養(yǎng)液一壞，接種至氧化鉀培養(yǎng)基內(nèi)，另取一壞培養(yǎng)液接種于不含氤化鉀的同樣培養(yǎng)基內(nèi)作對(duì)照管，接種后即以橡膠塞塞緊，培養(yǎng)24?48h,觀察結(jié)果。對(duì)照管內(nèi)有菌生長(zhǎng)（混濁），而試驗(yàn)管也有

8、菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性反應(yīng)；對(duì)照管有菌生長(zhǎng)（混濁）而試驗(yàn)管無(wú)菌生長(zhǎng)（清亮）為陰性反應(yīng)。沙門菌應(yīng)為陰性反應(yīng)。6.7.4賴氨酸脫竣酶試驗(yàn)用接種壞沾取少許培養(yǎng)物，接種在賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基中，同時(shí)接種一支不含賴氨酸的同樣培養(yǎng)基作為對(duì)照管，培養(yǎng)24?48h觀察結(jié)果。對(duì)照管黃色（產(chǎn)酸），試驗(yàn)管呈紫色為陽(yáng)性反應(yīng)（賴氨酸脫竣產(chǎn)堿）；試驗(yàn)管黃色為陰性反應(yīng)。沙門菌應(yīng)為陽(yáng)性反