釀酒酵母表面展示表達(dá)系統(tǒng)及應(yīng)用.ppt

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1、釀酒酵母表面展示表達(dá)系統(tǒng)及應(yīng)用報(bào)告人：劉順2010.11.101概念兩種系統(tǒng)23應(yīng)用主要內(nèi)容4優(yōu)缺點(diǎn)一、概念釀酒酵母表面展示表達(dá)系統(tǒng)：一種固定化表達(dá)異源蛋白質(zhì)的真核展示系統(tǒng)，即把異源靶蛋白基因序列與特定的載體基因序列融合后導(dǎo)入酵母細(xì)胞，利用釀酒酵母細(xì)胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到膜表面的機(jī)制（糖基磷脂酰肌醇，GPI錨定），使靶蛋白表達(dá)并定位于酵母細(xì)胞表面，之后用葡聚糖酶抽提細(xì)胞壁目的蛋白。二、兩種系統(tǒng)釀酒酵母細(xì)胞壁主要由外層的甘露糖蛋白和內(nèi)層的葡聚糖骨架組成，兩者通過(guò)共價(jià)健相連。外層甘露糖蛋白有兩種類型：一種是通過(guò)非共價(jià)健與酵母細(xì)胞壁松散相連并能被ＳＤＳ提取出來(lái)的低分子量蛋

2、白；一種是必須被葡聚糖酶酶解細(xì)胞壁的β-１，3-和β-１，６-葡聚糖層后才能被ＳＤＳ抽提的高分子量蛋白，包括凝集素、絮凝素、Sed1p、Cwp1p、Cwp2p和Tip1p、Tir1p、Srp1p等。后者的結(jié)構(gòu)中大多都含有GPI錨定區(qū)域其中分別由AGα1、AGa1／AGa2和Flo1表達(dá)異源蛋白的凝集素和絮凝素酵母細(xì)胞展示表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用較多。凝集素展示表達(dá)系統(tǒng)α凝集素和ａ凝集素是酵母細(xì)胞壁上的兩種甘露糖蛋白，它們?cè)卺劸平湍傅慕慌湫挺粒ǎ停粒驭粒┖徒慌湫停幔ǎ停粒裕幔﹩伪扼w細(xì)胞之間介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的性粘附，使細(xì)胞融合形成雙倍體。凝集素展示表達(dá)系統(tǒng)凝集素展示表達(dá)系統(tǒng)凝

3、集素展示表達(dá)系統(tǒng)絮凝素展示表達(dá)系統(tǒng)絮凝素Flo1p是一種新興的展示系統(tǒng),它是釀酒酵母細(xì)胞表面類似凝集素的細(xì)胞壁蛋白。目前，已經(jīng)形成了兩種類型的絮凝素展示系統(tǒng)：一是GPI系統(tǒng)；根據(jù)目的蛋白的特性和實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定截去Flo1p肽段的長(zhǎng)度,然后,目的蛋白的C端融合到錨定序列上。二是利用Flo1p的絮凝結(jié)構(gòu)域的黏附能力創(chuàng)建一個(gè)表面展示系統(tǒng)。GPI系統(tǒng)絮凝結(jié)構(gòu)域系統(tǒng)應(yīng)用近幾年來(lái)，釀酒酵母細(xì)胞表面展示表達(dá)系統(tǒng)迅速發(fā)展并在多個(gè)領(lǐng)域獲得應(yīng)用，展現(xiàn)出廣闊的發(fā)展前景。1、作為生物催化劑展示表達(dá)各種酶蛋白：淀粉分解酶、纖維素分解酶、脂酶2、環(huán)境治理中展示表達(dá)金屬蛋白3、蛋白質(zhì)分子的

4、相互作用及組合蛋白庫(kù)的構(gòu)建4、可作為生物傳感器的熒光蛋白的展示表達(dá)5、免疫學(xué)中的應(yīng)用問(wèn)題和展望優(yōu)點(diǎn)1、可克隆較大外源蛋白2、對(duì)表達(dá)的外源蛋白質(zhì)進(jìn)行有效的折疊、糖基化和形成二硫鍵,并與葡聚糖共價(jià)結(jié)合，耐SDS抽提3、酵母生產(chǎn)快,容易培養(yǎng)，展示蛋白能穩(wěn)定地在子代細(xì)胞中表達(dá)4、表達(dá)的蛋白可用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)進(jìn)行靈敏而方便地檢測(cè)和篩選缺點(diǎn)：1、天然活性不夠，表達(dá)的蛋白可能不完整2、表達(dá)量也不夠,而且酒精往往會(huì)抑制生長(zhǎng)3、多拷貝載體不穩(wěn)定，整合載體則拷貝數(shù)低，表達(dá)的蛋白量少ThankYou!