石蠟包埋步驟-使用.doc

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1、石蠟包埋步驟1.取材固定：離體的組織不及時(shí)固定，組織就會(huì)自溶，抗原就會(huì)擴(kuò)散。固定就是加入一些可以讓蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)（比如說甲醛），使得蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)被固定住，不再發(fā)生變化，同時(shí)也不會(huì)再發(fā)生一些活性反應(yīng)，這樣才好做后續(xù)的染色步驟。常見固定液是4%的多聚甲醛和飽和苦味酸。根據(jù)不同目的、組織特征代表性取材。取的材料應(yīng)該小而薄。便于固定劑迅速滲入內(nèi)部，一般厚度不超過2mm，大小不超過5×5mm2。每個(gè)組織最好多切幾塊。新鮮組織固定（組織塊不宜太大太厚，這樣固定液很難進(jìn)入里面，可能會(huì)導(dǎo)致在較短的時(shí)間內(nèi)脫水不完全，引起一系列的問題

2、，比如浸蠟不徹底，切片不好完成，切不完整。導(dǎo)致后來切片染色的脫落，造成染色的失敗。組織塊也不能太小，否則不能保證切片數(shù)量，且透明時(shí)間和浸蠟時(shí)間不能很好的把握。）固定時(shí)間因固定劑種類而異，大多6-12小時(shí)，一般不超過12小時(shí)。視組織固定的難易程度而定。后續(xù)如果做免疫組化，不應(yīng)超過12小時(shí)；后續(xù)如果做HE染色，不應(yīng)超過24小時(shí)。固定完之后用水洗（目的：洗去滲入組織的固定液，終止固定以免影響對(duì)組織的內(nèi)結(jié)構(gòu)的觀察，分析。換液兩次，一次半小時(shí)。）之后可直接脫水包埋或放入75%的乙醇4度可長期保存。2.脫水：從75%的乙醇中取出

3、，分別放到80%，90%，100%(Ⅰ)的乙醇中半小時(shí)，再放入100%乙醇中15min。固定完直接水洗包埋的，應(yīng)從70%乙醇開始，易碎組織從50%乙醇開始。組織脫水時(shí)間不應(yīng)過長，尤其是高濃度乙醇，要特別注意控制時(shí)間。3.透明：透明的目的是置換組織內(nèi)的脫水劑，為下一步浸蠟起到橋梁作用，二甲苯可以去除脂肪。乙醇+二甲苯（1:1）2h；二甲苯（Ⅰ），二甲苯（Ⅱ）各10min（根據(jù)組織的大小和透明的難易程度不同，透明的時(shí)間可以根據(jù)具體情況調(diào)整。顏色淺的組織表面油亮，可以透過光時(shí)效果較好，顏色較深的組織至少邊緣可以透光。類似于

4、風(fēng)干的杏肉。）4.浸蠟：浸蠟?zāi)康氖侵脫Q組織中的透明劑，為包埋作準(zhǔn)備。二甲苯+石蠟（1:1）2h；石蠟（Ⅰ）1h；石蠟（Ⅱ）2h.（浸蠟的時(shí)間也可以長一些）5.包埋：在冰盒上進(jìn)行，將融好的純蠟（最好提前4小時(shí)以上開始融蠟，新蠟更難融）倒入蠟盒（可以浸沒組織就行，大約蠟盒的三分之一）由于蠟盒底部與冰盒接觸，底部的蠟會(huì)先凝固，這樣就可以把組織用鑷子夾住立在底部。然后繼續(xù)將蠟盒倒?jié)M，便于切片機(jī)夾住蠟塊。待蠟塊完全凝固，包埋就完成了。