石蠟包埋基本流程.doc

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1、石蠟包埋基本流程一、取材和固定取材宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3,分離后應(yīng)迅即殺死固定。用4%PFA固定24小時(shí)以上，流水沖洗24小時(shí)，置于70%~80%乙醇中，可長(zhǎng)期保存。二、脫水脫水的目的是除去組織中的水分，便于透明、浸蠟和包埋，因?yàn)檫@些步驟的試劑均不能與水混溶，故必須脫水。脫水不宜操之過(guò)急或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，一般為50%→70%→80%→95%（此時(shí)可加番紅，使組織著色便于包埋時(shí)定位）→100%，每級(jí)停留2~4小時(shí)或更長(zhǎng)，但無(wú)水乙醇中時(shí)間宜短。1、95%乙醇兩道I2~4hII2h2、無(wú)水乙醇兩道I1hII1h三、透明透明的目的是將脫水劑從組織中除去，二甲苯既能與乙醇混合，又能與石蠟混溶，其

2、穿透能力強(qiáng)，但易使材料變脆，使用時(shí)不能停留過(guò)長(zhǎng)，若組織放入二甲苯中有白色混濁出現(xiàn)，說(shuō)明脫水不徹底，應(yīng)退回純乙醇中再行脫水3、二甲苯+無(wú)水乙醇（1:1）20min4、二甲苯兩道I20minII20min四、浸蠟此步的目的是逐漸除去透明劑，并為包埋劑所替代。浸蠟過(guò)程一般從低溫到高溫、從低熔點(diǎn)到高熔點(diǎn)逐步進(jìn)行，浸蠟需徹底。5、浸軟蠟（50~52℃）兩道I30minII90min6、浸硬蠟（56~58℃）I60minII30min五、包埋注意溫度、切面、組織擺放的空間位置?？蓪悠肪幪?hào)封于蠟塊上，以免樣品混淆。