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《煙草青枯病菌土壤拮抗細菌的篩選及鑒定-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、江蘇農業(yè)科學2014年第42卷第6期·——99-——陸錚錚，蔣選利．煙草青枯病菌土壤拮抗細菌的篩選及鑒定[J]．江蘇農業(yè)科學，2014，42(6)：99—102煙草青枯病菌土壤拮抗細菌的篩選及鑒定陸錚錚，蔣選利(1．遵義師范學院生命科學學院，貴州遵義563002；2．貴州山地農業(yè)病蟲害重點實驗室／貴州大學農學院，貴州貴陽550025)摘要：為篩選出煙草青枯病菌的拮抗細菌，從貴州省天柱縣、黃平縣及大方縣煙草根圍土壤中共分離出65株細菌。采用平板噴霧法篩選獲得20株拮抗細菌，且抑制效果穩(wěn)定，其中有2株拮
2、抗細菌平均抑菌圈直徑大于20mm，分別為c3—5(39．98mm)和C5—3(48．88mm)。采用16SrDNA序列分析以及形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀、染色結果等方法進行鑒定，結果顯示，c3—5為蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)，C5—3為球形賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillussphaericu)。關鍵詞：煙草青枯??；拮抗細菌；生物防治；篩選；鑒定；蠟樣芽孢桿菌；球形賴氨酸芽孢桿菌中圖分類號：S435．72文獻標志碼：A文章編號：1002—1302(2014)06—0099—03青枯
3、病病原菌原名為茄假單胞桿菌(Pseudomonus平板劃線分離法進行分離、純化。鑒定為煙草青枯病病原solanacearumE．F．Smith)，1995年更改為茄勞爾氏菌(砌菌后，用蘸根接種法回接，待發(fā)病后，再分離和純化病原stoniasolanaz~．a(chǎn)rumE．F．Smith)。煙草青枯病是一種典型菌，并采用滅菌蒸餾水保存方法保存?zhèn)溆谩?。的維管束細菌性土傳病害，最顯著的癥狀是枯萎。該病害廣1．1．2土壤樣品從貴州省天柱縣社學鄉(xiāng)、黃平縣白塘村及泛分布于熱帶、亞熱帶等50多個國家和地區(qū)，在我國南方
4、普大方縣雙山鎮(zhèn)的煙草種植地中選擇發(fā)青枯病的煙田，從中采遍存在且危害嚴重，它具有發(fā)病快、危害重、損失大等特點，且集健康煙株的根圍土壤，共12份。常與黑脛病和空莖病混合發(fā)生J，給防治帶來了較大的困1．1．3培養(yǎng)基及試劑難。目前，對于煙草青枯病的防治還是以化學防治為主，近幾1．1．3．1分離和篩選培養(yǎng)基煙草青枯病病原菌和土壤細年研究者們篩選出了許多對煙草青枯病有較好抑制效果的藥菌的分離以及對峙培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基均為牛肉膏蛋白胨瓊劑，如30．2％芽敵水劑、72％農用硫酸鏈霉素以及1B。脂培養(yǎng)基(NA)。石硫
5、合劑等藥劑。但是化學農藥會對環(huán)境造成污染，威脅1．1．3．2細菌鑒定培養(yǎng)基馬鈴薯塊斜面培養(yǎng)基：將馬人畜的健康和安全，且隨著施用年限和濃度的增加，易導致病鈴薯洗凈去皮，切成長3．5～4．0cm、寬0．5CI1"1的楔形薯塊斜原菌產(chǎn)生抗藥性。隨著煙草青枯病防治研究的不斷深入，生面。為防止薯塊干燥，先在試管底部放1團吸飽水的棉花，再物防治已成為防治該病害的研究熱點，尤其是通過篩選根圍將薯塊粗的一端向下放入試管中，塞上棉塞，常規(guī)滅菌。為了土壤中的拮抗菌與病原菌競爭營養(yǎng)和生存空間的方法，降低中和細菌分解淀粉而
6、產(chǎn)生過多的酸，可在滅菌前于薯塊斜面病原菌的繁殖率，從而有效控制病害，且對環(huán)境無污染，是一上加少量碳酸鈣。牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基：牛肉膏3—5g、種綠色的防治方法。土壤是一切自然環(huán)境中細菌的總發(fā)源蛋白胨10g、NaC15g、蒸餾水1000mL，pH值7．0～7．2。地，在土壤中存在著許多對人類有益的細菌，它們具有分解或1．1．3．3細菌鑒定染色劑革蘭氏染色劑和芽孢染色劑者合成的作用，是人類的功臣?？梢哉f，土壤為篩選拮抗(孔雀綠染色劑)。細菌防治植物病害提供了很多的細菌資源。且細菌容易分1．2方法離、繁
7、殖較快，是生物防治的理想菌種。因此，本研究從貴州1．2．1病原菌分離選取煙草青枯病病株發(fā)病部位的一小省天柱縣社學鄉(xiāng)等發(fā)青枯病的煙田土壤中篩選出對青枯病菌塊組織(0．5cmx0．5cm)制成臨時裝片，用顯微鏡觀察細菌具有拮抗作用的細菌并進行鑒定。特有的噴菌現(xiàn)象，再選取被檢測發(fā)病部位周圍的組織，采用平板劃線分離法分離。1材料與方法1．2．2土壤采集選取種植年限較長且青枯病發(fā)生較重的1．1材料煙田，在煙草旺長期采集健康煙株的根圍土壤(避免雨季采1．1．1供試菌株從貴州省麻江縣五寨鄉(xiāng)煙草種植區(qū)中選土)。取樣
8、時先除去地面落葉和垃圾，撥開表土約5cm深，擇發(fā)煙草青枯病嚴重的田塊，從中采集病株帶回實驗室，采用剔除石礫和植被殘根等雜物，每份樣土約30g(同地區(qū)取樣點至少相距100m)，裝入自封袋并做上記號，帶回實驗室。1．2．3土壤細菌分離采用稀釋平板法：用1／100天平準收稿日期：2013—09—22確稱取土樣10g，放入裝有90mL無菌水的三角瓶中(瓶里放基金項目：中國煙草總公司貴州省公司科技項目(編號：200917)；貴幾粒無菌玻璃珠)，置于搖床振蕩20min，使微生物細
