最新血清清蛋白的分離、純化和鑒定教學講義ppt課件.ppt

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1、血清清蛋白的分離、純化和鑒定方法一：3，5-二硝基水楊酸測淀粉酶活性一、實驗目的1.掌握用3，5-二硝基水楊酸測淀粉酶活性的方法2.熟悉3，5-二硝基水楊酸測淀粉酶活性的原理二、基本原理1、測量依據(jù)淀粉酶催化淀粉分子中α-1,4糖苷鍵水解,產生還原糖淀粉酶活力的大小與產生的還原糖的量成正比，可以單位體積樣品在一定時間內生成的還原糖的量表示酶活力。（3）1%3,5-二硝基水楊酸試劑：稱取3,5-二硝基水楊酸1g、NaOH1.6g、酒石酸鉀鈉30g，定容至100ml水中，緊蓋瓶塞，勿使CO2進入；麥芽糖標準溶液：取

2、麥芽糖0.1g溶于100ml水中；（5）pH6.8的磷酸緩沖液:取磷酸二氫鉀6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至6.8，加水稀釋至1000ml即得。（6）0.4mol/L的NaOH溶液；（7）淀粉酶溶液三、操作步驟實驗步驟淀粉酶活力測定(1)取試管：取試管4支,2支為對照管,2支為測定管。(2)裝溶液：在2支對照管中分別加入4m10.4mol/L氫氧化鈉。(3)加試劑：在4支試管中各加入1mlpH5.6的檸檬酸緩沖液和淀粉酶溶液lml?；静僮?4)保溫：將4支試管置另一個

3、37℃恒溫水浴中保溫15min,再向各管分別加入37℃下預熱的1％淀粉溶液2m1,搖勻,立即放入37℃恒溫水浴保溫5min。取出后向測定管迅速加入4ml0.4mol/L氫氧化鈉,終止酶活動,準備測糖。麥芽糖的測定：(1)標準曲線的制作:取試管7支,編號.分別加入麥芽糖標準液（1mg/ml）0,0.2,0.6,1.0,1.4,1.8,2.0ml，然后用吸管向各管加蒸餾水使溶液達2.0ml,再各加3,5一二硝基水楊酸試劑2.0m1,置沸水浴中加熱10min，取出冷卻,用蒸餾水稀釋至25m1?；靹蚝笥梅止夤舛扔嬙?2

4、0nm波長下進行比色,記錄吸光度，以吸光度為縱坐標，以麥芽糖含量（mg）為橫坐標，繪制標準曲線②（操作的關鍵環(huán)節(jié)）樣品的測定:取酶作用后的各管溶液2m1,分別放入相應的8支25ml具塞刻度試管中,各加入2m13,5-二硝基水楊酸試劑。置沸水浴中加熱10min.取出冷卻,用蒸餾水稀釋至25m1?；靹蚝笥梅止夤舛扔嬙?20nm波長下進行比色,記錄吸光度，根據(jù)樣品比色吸光度平均值,從標準曲線查出麥芽糖含量,最后進行結果計算。計算公式：相關實驗一、實驗拓展方法二：碘-淀粉測定淀粉酶活性一、實驗目的掌握測定淀粉酶活性的原

5、理熟悉測定淀粉酶活性操作方法二、基本原理原理：淀粉酶催化淀粉分子中α-1,4糖苷鍵水解,產生葡萄糖、麥芽糖及糊精。利用已知濃度的淀粉溶液作為底物，加入一定量的淀粉酶，在適應條件下淀粉酶將部分淀粉水解。在底物過量的條件下，反應后加入碘液與未被水解的淀粉結合成藍色復合物，其藍色的深淺與淀粉的濃度成正相關,用分光光度計法測出反應后淀粉的濃度，從而推算出單位體積樣品在一定時間內消耗淀粉的量。五、討論依據(jù)血清電泳的結果作為陽性對照，判斷鹽析過濾液中有無清蛋白。②分析所獲得的清蛋白純度①分析有無分離獲得清蛋白根據(jù)層析液樣品

6、電泳結果中雜蛋白條帶出現(xiàn)的情況，判斷分離的清蛋白純度。六、結論腎囊腫圍手術期護理陳靜腎囊腫腎囊腫是一種良性病變，成人常見，囊腫直徑>5cm可壓迫腎實質，造成腎功能損害，引起腎區(qū)疼痛或發(fā)生出血感染、高血壓等。腹腔鏡下腎囊腫去頂減壓術與傳統(tǒng)的開放性手術相比，具有切口小、創(chuàng)傷小、恢復快、療效可靠等優(yōu)點，逐漸成為治療腎囊腫的最佳選擇。腎囊腫最常見的是良性腫瘤，以單純性囊腫為最多。常見于30-60歲，男：女為2:1，左右側發(fā)病數(shù)無差異，單側腎或雙側腎發(fā)病，不伴其他先天異常。囊腫大小不一，大者可達數(shù)十個，內容不是尿，是清亮

7、漿液性液體。腎臟解剖圖腎囊腫臨床癥狀癥狀不明顯腹部不適，脹滿、惡心等。診斷常規(guī)檢查B超CT檢查。治療1.非手術治療2.手術治療腎囊腫在4cm以上現(xiàn)多采用腹腔鏡腎囊腫去頂術。較大或疑有惡性變應手術探查。適應癥單純性腎囊腫經皮穿刺硬化劑失敗者多囊腎禁忌癥腫瘤性腎囊腫或囊腫針吸細胞學發(fā)現(xiàn)癌細胞者類似腎囊腫的腎積水和腎盞憩室嚴重感染或腎周有嚴重粘連者多囊腎腎功能嚴重障礙者術前護理心理護理術前準備心理護理心理護理應貫穿整個手術及住院過程的始末。由于患者對本病知識的缺乏，再加上后腹腔鏡技術是一項較先進的技術，不易被患者了解

8、，因而患者擔心療效及并發(fā)癥，情緒易波動，造成不同程度緊張、焦慮、恐懼等不良心理，影響手術效果及傷口愈合。心理護理護士應主動與患者交流，積極和患者進行溝通，詳細介紹術前、術中和術后的注意事項，給予心理疏導的同時耐心向患者及家屬介紹手術過程、方法及術后注意事項，強調此術式與傳統(tǒng)手術比較具有創(chuàng)傷小、痛苦輕、恢復快的特點，并用成功病例進行現(xiàn)身示范，增強患者對手術的信心，達到配合手術的目的。術前