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血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的測(cè)定及其臨床意義檢驗(yàn)科10/18/20221.
1概述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）又稱(chēng)激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，系統(tǒng)命名為肽基-二肽水解酶。屬血管內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)合酶，由肽的C端將氨基酸切為兩段變換而來(lái)，可使肽鏈C端二肽殘基水解。ACE可催化血管緊張素Ⅰ（十肽）水解成八肽的血管緊張素Ⅱ，使血管進(jìn)一步收縮，血壓升高。也可作用于腎上腺皮質(zhì)，促進(jìn)醛固酮的分泌。因此，ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮的重要成分。10/18/20222.
2概述ACE還催化具有降壓作用的緩激肽水解而失去活性。ACE廣泛分布于人體各組織，以附睪、睪丸及肺的含量較豐富，其中肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞ACE活性最高。腎、腦垂體等組織酶活性較低。ACE測(cè)定方法主要有比色法、酶偶聯(lián)法等。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的別名：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶10/18/20223.
3轉(zhuǎn)換酶的測(cè)定原理血管緊張素.（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：底物馬尿酰-甘氨酰-甘氨酸（Hip-Gly-Gly）在ACE作用下，釋放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者與三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黃色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly），其含量與ACE活性呈正相關(guān)。（2）酶偶聯(lián)法：ACE使底物馬尿酸雙甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成馬尿酸（Hip）和雙甘肽（Gly-Gly），后者與L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GGCN）和γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（GGT）偶聯(lián)，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm處測(cè)其吸光度，以反映ACE活性。10/18/20224.
4試劑（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：①底物液：用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/LHGG溶液，此液中含0.4mol/LNa2SO4、0.3mol/LNaCl，調(diào)pH7.3。②0.1mol/L硼酸鹽緩沖液（pH9.0）。③100g/L鎢酸鈉（含2個(gè)水）溶液。④0.33mol/LNaSO4。⑤60mmol/LTNBS溶液10/18/20225.
5（2）酶偶聯(lián)法：①50mmol/LHEPES緩沖液：稱(chēng)羥、乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）1.191g，加雙蒸餾水100ml溶解，用于配制GGT、CGCN和基質(zhì)緩沖液。②20kU/LGGT貯存液：取HEPES緩沖液5ml，加入GGT100U，混勻后分裝小瓶，－20℃。保存。③6.7kU/LGGT應(yīng)用液：將上述貯存液用二倍量的HEPES稀釋配制。④0.1mmol/LGGCN溶液：稱(chēng)GGCN20mg，加入50mmol/LHEPES60ml，溶解后4℃保存。10/18/20226.
6⑤基質(zhì)緩沖液：稱(chēng)HEPES1.191g，NaCl1.755g，Na2SO45.68g，用雙蒸餾水溶解后，用NaOH調(diào)pH至8.0，再補(bǔ)充雙蒸餾水至100ml，4℃保存。⑥基質(zhì)液：由Hip-Gly-Gly89.5mg加基質(zhì)緩沖液10ml溶解混合而成。此液各試劑終濃度為：HEPES50mmol/L，NaCl30mmol/L，Na2SO4400mmol/L，Hip-Gly-Gly30mmol/L。⑦10mmol/L雙甘肽標(biāo)準(zhǔn)液：稱(chēng)Gly-Gly52.9mg加雙蒸餾水溶解，并稀釋至100ml，此為貯存液（40mmol/L）。1份貯存液和3份雙蒸餾水混合即為應(yīng)用液。10/18/20227.
7正常值（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：26.1～56.7kU/L。（2）酶偶聯(lián)法：12-68U/L。10/18/20228.
8化驗(yàn)結(jié)果臨床意義血清ACE測(cè)定主要同于肺部疾病的診斷，對(duì)其他系統(tǒng)疾病的診療也有一定價(jià)值。(1)肺部疾?。航^大多數(shù)結(jié)節(jié)病患者血清ACE活力升高，其陽(yáng)性率及幅度與病活動(dòng)與否和病變累及的范圍有關(guān)。肺結(jié)核也可升高，而哮喘發(fā)作、急性心原性肺水腫、慢性阻塞性肺疾患、自發(fā)性氣胸、肺纖維化、成人呼吸窘迫綜合征等血清ACE均有不同程度下降。（2）肝臟疾病：多數(shù)肝臟病患者ACE活性升高，升高幅度依次為肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝則正常。10/18/20229.
9（3）甲狀腺疾病：甲亢患者ACE活性明顯高于其他甲狀腺疾病，且酶活力高低與T3、T4含量呈正相關(guān)。（4）其他：糖尿病、虹膜炎、免疫母細(xì)胞肉瘤等，血清ACE升高；高血壓、結(jié)腸炎等則降低。10/18/202210.
10附注（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：①標(biāo)本在室溫或冰箱存放1周，酶活力無(wú)明顯變化，－15℃保存3周酶活性穩(wěn)定。②膽紅素對(duì)ACE有明顯抑制作用，故重度黃疸可使測(cè)定結(jié)果偏低。EDTA是ACE的強(qiáng)抑制劑，NaCl和Na2SO4對(duì)ACE有明顯的活化作用，溶血、脂血對(duì)結(jié)果無(wú)影響。③本法與紫外分光光度法酶活力單位一致，但其測(cè)得值為紫外法的9倍。10/18/202211.
11（2）酶偶聯(lián)法：①當(dāng)?shù)孜飌H8.0，GGCN1.0mmol/L，GGT6.7ku/L時(shí)，ACE活性與吸光度值有良好線(xiàn)性。線(xiàn)性范圍大，即使ACE在1500U/L，不用稀釋也可獲得理想結(jié)果。②GGCN濃度選擇：本反應(yīng)體系中GGCN既是測(cè)定酶ACE的受體，又是指示酶GGT的供體。以1.0mmol/L的GGCN最理想，在此濃度下GGCN與吸光度保持良好的線(xiàn)性。③GGT對(duì)測(cè)定的影響：本反應(yīng)利用GGT將雙甘肽與GGCN偶聯(lián)，生成黃色的3-羧基-4-硝基苯胺，其加入量可直接影響測(cè)定結(jié)果。GGT高濃度可使底物過(guò)度消耗，使吸光度偏離曲線(xiàn)；低濃度GGT又使吸光度偏低，靈敏度不高。每次加入0.335UGGT，可獲得理想吸光度與線(xiàn)性。在此濃度下，酶基質(zhì)液的空白管吸光度＜0.1A。10/18/202212.
12相關(guān)疾病結(jié)節(jié)病、肺結(jié)核、肺水腫、自發(fā)性氣胸、氣胸、肝硬化、脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黃疸10/18/202213.
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