血管緊張素轉(zhuǎn)化酶37778講課教案.ppt

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1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的測(cè)定及其臨床意義檢驗(yàn)科概述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)又稱激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶,系統(tǒng)命名為肽基-二肽水解酶。屬血管內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)合酶,由肽的C端將氨基酸切為兩段變換而來(lái),可使肽鏈C端二肽殘基水解。ACE可催化血管緊張素Ⅰ(十肽)水解成八肽的血管緊張素Ⅱ,使血管進(jìn)一步收縮,血壓升高。也可作用于腎上腺皮質(zhì),促進(jìn)醛固酮的分泌。因此,ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮的重要成分。概述ACE還催化具有降壓作用的緩激肽水解而失去活性。ACE廣泛分布于人體各組織,以附睪、睪丸及肺的含量較豐富,其中肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞ACE活性最高。腎、腦垂體等組織酶活性較低。ACE測(cè)定方法主要有比色法、酶偶聯(lián)

2、法等。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的別名:血管緊張素轉(zhuǎn)化酶轉(zhuǎn)換酶的測(cè)定原理血管緊張素.(1)三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:底物馬尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)在ACE作用下,釋放出甘氨酰-甘氨酸(Gly-Gly),后者與三硝基苯磺酸(TNBS)作用,生成黃色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸(TNP-Gly-Gly),其含量與ACE活性呈正相關(guān)。(2)酶偶聯(lián)法:ACE使底物馬尿酸雙甘肽(Hip-Gly-Gly)水解成馬尿酸(Hip)和雙甘肽(Gly-Gly),后者與L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(GGCN)和γ-谷氨?;D(zhuǎn)移酶(GGT)偶聯(lián),形成3-羧基-4-硝基苯胺,在340nm處測(cè)

3、其吸光度,以反映ACE活性。試劑(1)三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:①底物液:用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/LHGG溶液,此液中含0.4mol/LNa2SO4、0.3mol/LNaCl,調(diào)pH7.3。②0.1mol/L硼酸鹽緩沖液(pH9.0)。③100g/L鎢酸鈉(含2個(gè)水)溶液。④0.33mol/LNaSO4。⑤60mmol/LTNBS溶液(2)酶偶聯(lián)法:①50mmol/LHEPES緩沖液:稱羥、乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)1.191g,加雙蒸餾水100ml溶解,用于配制GGT、CGCN和基質(zhì)緩沖液。②20kU/LGGT貯存液:取HEPES緩沖液5ml,加入GGT10

4、0U,混勻后分裝小瓶,-20℃。保存。③6.7kU/LGGT應(yīng)用液:將上述貯存液用二倍量的HEPES稀釋配制。④0.1mmol/LGGCN溶液:稱GGCN20mg,加入50mmol/LHEPES60ml,溶解后4℃保存。⑤基質(zhì)緩沖液:稱HEPES1.191g,NaCl1.755g,Na2SO45.68g,用雙蒸餾水溶解后,用NaOH調(diào)pH至8.0,再補(bǔ)充雙蒸餾水至100ml,4℃保存。⑥基質(zhì)液:由Hip-Gly-Gly89.5mg加基質(zhì)緩沖液10ml溶解混合而成。此液各試劑終濃度為:HEPES50mmol/L,NaCl30mmol/L,Na2SO4400mmol/L,Hip-Gly-Gly30

5、mmol/L。⑦10mmol/L雙甘肽標(biāo)準(zhǔn)液:稱Gly-Gly52.9mg加雙蒸餾水溶解,并稀釋至100ml,此為貯存液(40mmol/L)。1份貯存液和3份雙蒸餾水混合即為應(yīng)用液。正常值(1)三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:26.1~56.7kU/L。(2)酶偶聯(lián)法:12-68U/L?;?yàn)結(jié)果臨床意義血清ACE測(cè)定主要同于肺部疾病的診斷,對(duì)其他系統(tǒng)疾病的診療也有一定價(jià)值。(1)肺部疾病:絕大多數(shù)結(jié)節(jié)病患者血清ACE活力升高,其陽(yáng)性率及幅度與病活動(dòng)與否和病變累及的范圍有關(guān)。肺結(jié)核也可升高,而哮喘發(fā)作、急性心原性肺水腫、慢性阻塞性肺疾患、自發(fā)性氣胸、肺纖維化、成人呼吸窘迫綜合征等血清ACE均有

6、不同程度下降。(2)肝臟疾?。憾鄶?shù)肝臟病患者ACE活性升高,升高幅度依次為肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝則正常。(3)甲狀腺疾?。杭卓夯颊逜CE活性明顯高于其他甲狀腺疾病,且酶活力高低與T3、T4含量呈正相關(guān)。(4)其他:糖尿病、虹膜炎、免疫母細(xì)胞肉瘤等,血清ACE升高;高血壓、結(jié)腸炎等則降低。附注(1)三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:①標(biāo)本在室溫或冰箱存放1周,酶活力無(wú)明顯變化,-15℃保存3周酶活性穩(wěn)定。②膽紅素對(duì)ACE有明顯抑制作用,故重度黃疸可使測(cè)定結(jié)果偏低。EDTA是ACE的強(qiáng)抑制劑,NaCl和Na2SO4對(duì)ACE有明顯的活化作用,溶血、脂血對(duì)結(jié)果無(wú)影響。③本法與紫外分光光度法

7、酶活力單位一致,但其測(cè)得值為紫外法的9倍。(2)酶偶聯(lián)法:①當(dāng)?shù)孜飌H8.0,GGCN1.0mmol/L,GGT6.7ku/L時(shí),ACE活性與吸光度值有良好線性。線性范圍大,即使ACE在1500U/L,不用稀釋也可獲得理想結(jié)果。②GGCN濃度選擇:本反應(yīng)體系中GGCN既是測(cè)定酶ACE的受體,又是指示酶GGT的供體。以1.0mmol/L的GGCN最理想,在此濃度下GGCN與吸光度保持良好的線性。③G

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