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《蘇云金芽孢桿菌BRCLLP29菌株cyt2基因的克隆、表達(dá)及殺蚊活性測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要Cyt蛋白是由蘇云金芽孢桿菌以色列亞種(Bacillusthuringiensis.subsp.israelensis，Bti)在芽形成孢階段產(chǎn)生的δ-內(nèi)毒素組成。本研究根據(jù)己報(bào)道在NCBI上的cyt2B基因序列，設(shè)計(jì)特異引物對(duì)BtLLP29菌株中總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到大小約為1,000bp的類似cyt2B基因，對(duì)該基因進(jìn)行克隆、表達(dá)，確定了菌株中cyt2B基因的存在，以pGEX-KG為表達(dá)載體構(gòu)建cyt2B基因的表達(dá)重組質(zhì)粒，并對(duì)其殺蚊活性進(jìn)行測(cè)定，從而試圖探索Cyt2B蛋白的生物活性
2、及其在菌株中的生物功能。結(jié)果表明，經(jīng)PCR擴(kuò)增、克隆、測(cè)序，獲得序列大小約為1,000bp的基因全序列，序列里包含兩個(gè)ORF，大小分別為789bp和117bp，其中789bp編碼約為262個(gè)氨基酸，與文獻(xiàn)中Cyt2B蛋白的氨基酸大小一致。利用NCBI上的Blast在線軟件進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)10個(gè)Btcyt2B基因序列以及多個(gè)基因組片段，其中與己報(bào)道的cyt2Ba7，cyt2Ba8等5個(gè)基因全序列（包括原始基因片段）同源性達(dá)到98%。因此，判斷克隆出來(lái)的基因序列為cyt2B基因。經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證誘導(dǎo)表達(dá)重組菌株，顯示該蛋
3、白大小約為30kD，確定該基因編碼的蛋白為Cyt2B。取Cyt2B蛋白表達(dá)重組菌株對(duì)白蚊伊蚊和致倦庫(kù)蚊進(jìn)行毒性測(cè)試，與BtLLP29菌株相比，該表達(dá)菌株并不顯示殺蚊活性。關(guān)鍵詞：蘇云金芽孢桿菌，Cyt2B蛋白，克隆，表達(dá)，殺蚊活性I福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文Cloning,expressionandidentificationthemosquitocidalofthecyt2BgeneinBacillusthuringiensisLLP29AbstractCyttoxinisproducedbyBacillusthurin
4、giensis.subsp.israelensis(Bti)duringsporulation.Basedonthecyt2BsequencereportedintheNCBI,thisstudyconstructedtwodegeneratedprimers.UsingtheseprimersandthetotalDNAoftheBtLLP29asatemplate,a1,082bpDNAfragmentwasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)andclonedintoE.c
5、oilJM109.Aftersequencing,thecyt2BproteinwasproducedinE.coilBL21usingpGEX-KGasexpressionvector.Thenucleotidesequenceshowedtwoopenreadingframes(ORF)inthecyt2Bfragment.Onewas789bplong,encodingaproteinof262aminoacide.ItisverysimilarinsizetothereportedCyt2Bprotein.The
6、homologysearchofthecloninggenedisplayedthatithad98%similarto5reportedgeneswhichwerereportedascyt2Ba7orcyt2Ba8.SDS-PAGEanalysisindicatedthattheCyt2Bproteinhadamolecularmassofabout30kD,similartothereportedCyt2Baproteinwhichwaspreviouslybeenshowntoxictomosquitos.Tox
7、icityactivitiesoftherecombinantstrainsweretestedonAedesalbopictusandCulexpipiensfatigans.ComparedwiththewildBtLLP29strain,therecombinantstraindidn’tshowanytoxicingagainstthem.Keywords:Bacillusthuringiensis,Cyt2,cloning,expression,mosquitocideII獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位（畢業(yè)
8、）論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下獨(dú)立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同對(duì)本研究做出貢獻(xiàn)的同志，都在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名
