quechers―高效液相色譜―串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定蘋果中赤霉素的殘留量

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1、QuEChERS―高效液相色譜―串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定蘋果中赤霉素的殘留量　　摘要利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立快速準(zhǔn)確測(cè)定蘋果中赤霉素（GA3）殘留量的方法：用乙腈作為提取試劑，振蕩提取樣品中的赤霉素，經(jīng)QuEChERS試劑包凈化，用高效反相液相色譜柱分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)定量。結(jié)果表明：該方法線性范圍為0.008～0.200mg/kg，回收率大于80%?！　￡P(guān)鍵詞赤霉素；QuEChERS；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜　　中圖分類號(hào)S611文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1007-5739（2016）08-0265-02　　生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是一類能對(duì)植物生長(zhǎng)起調(diào)節(jié)作用的活性物質(zhì)，其中赤霉素（GA3）是較常見的一種。赤霉素

2、（GA3）屬于植物內(nèi)源激素，在植物體內(nèi)本來(lái)就有，它在植物生長(zhǎng)與發(fā)育的各個(gè)階段中都發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，是一種廣譜性的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[1]。赤霉素具有促進(jìn)植物細(xì)胞伸長(zhǎng)、誘導(dǎo)植物細(xì)胞的分裂與分化的作用，對(duì)瓜果類具有顯著的增產(chǎn)效果[2]，因而在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中有廣泛應(yīng)用。赤霉素可能干擾人體正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)，長(zhǎng)期食用會(huì)在人體中蓄積，造成器官的慢性中毒，并可能引起癌變，嚴(yán)重危及消費(fèi)者的身心健康[1]。國(guó)內(nèi)外都已經(jīng)對(duì)蔬菜水果中的赤霉素殘留量做了一定限制。為了提高產(chǎn)量、增加收入，部分生產(chǎn)者濫用赤霉素，會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素殘留超標(biāo)，危害群眾身體健康，存在極大的安全隱患。5　　蘋果作為我國(guó)最常見的水果之一，其食用安

3、全備受關(guān)注。高效液相色譜法[3]和傳統(tǒng)的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)赤霉素殘留量，過程復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)。本試驗(yàn)以蘋果為樣品代表，研究了利用QuEChERS離散型固相萃取包凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定水果中赤霉素殘留的方法，過程簡(jiǎn)單快速，并優(yōu)化了前處理方法和儀器條件?！　?材料與方法　　1.1試驗(yàn)材料　　1.1.1試驗(yàn)儀器。Agilent1290-6420高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；Milli-QAdvantageA10超純水儀；Sartorius電子天平；HitachiCR21N高速冷凍離心機(jī)；Caliper水浴氮吹儀；VWR漩渦混合器?！　?.1.2試驗(yàn)材料。Merck色譜純乙腈；Merck色譜純甲醇；

4、色譜純甲酸；分析純氯化鈉（廣州試劑）；德國(guó)Dr.Ehrenstorfer的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%）；安捷倫QuEChERS提取包（含離心管，貨號(hào)5982-5058CH）?！　?.2試驗(yàn)方法　　1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。準(zhǔn)確稱量赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g，用色譜純甲醇溶解，用容量瓶定容至100mL，配制成1000μg/mL的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-20℃的冰箱保存。本試驗(yàn)所使用的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液均由儲(chǔ)備液稀釋而成?！　?.2.2樣品前處理。取蘋果樣品經(jīng)食物調(diào)理機(jī)打碎至勻漿狀，用塑料有蓋樣品瓶保存。稱取蘋果樣品10.0g于50mL的塑料離心管，加入氯化鈉3～5g，再加入乙腈10mL，蓋上離心管蓋子

5、，用振蕩機(jī)振蕩30min，然后在8000r/min條件下離心3min，吸取55mL上清液到QuEChERS試劑包的離心管（內(nèi)含PSA4g和無(wú)水硫酸鎂1.2g）中，蓋上蓋子，用漩渦混合器混合1min，8000r/min離心2min，取上清液過0.2μm濾膜，待測(cè)?！　?.2.3色譜條件。色譜柱：AgilentZORBAXECLIPSEPLUSC18柱（2.1×100mm，1.8μm），柱溫40℃；流動(dòng)相：A是甲醇，B是0.1%甲酸水（V/V）；流動(dòng)相變化梯度如表1所示；流速0.3mL/min；進(jìn)樣體積2.0μL?！　?.2.4質(zhì)譜條件。離子源使用電噴霧離子源（ESI），干燥氣溫度為350℃，流速

6、為11mL/min，霧化器壓力為310.275kPa，采用負(fù)離子采集模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方法測(cè)定。赤霉素母離子，定性離子定量離子等質(zhì)譜采集參數(shù)具體如表2所示?！　?結(jié)果與分析　　2.1提取液的選取　　由于赤霉素難溶于水，因此本試驗(yàn)考慮使用甲醇以及乙腈作為提取劑。試驗(yàn)結(jié)果表明，使用甲醇作為提取劑時(shí)，赤霉素的回收率不理想。而使用乙腈作為提取劑時(shí)，回收率均大于80%，優(yōu)于甲醇提取的結(jié)果，因此試驗(yàn)最終選擇乙腈作為樣品提取試劑?！　?.2流動(dòng)相選擇5　　試驗(yàn)初期，使用甲醇和純水作為流動(dòng)相，結(jié)果響應(yīng)偏低，靈敏度不高，并且重復(fù)性差，這可能是由于赤霉素在水溶液中不穩(wěn)定容易分解有關(guān)。把流動(dòng)相中的純水換成0

7、.1%甲酸水（V/V），情況有所好轉(zhuǎn)，響應(yīng)增高了，也更穩(wěn)定了，這是因?yàn)槌嗝顾卦谒嵝詶l件下穩(wěn)定，并且流動(dòng)相中的酸能促進(jìn)增強(qiáng)負(fù)離子模式下的赤霉素分子離子化的結(jié)果。　　2.3色譜條件優(yōu)化　　本試驗(yàn)嘗試使用AgilentZORBAXECLIPSEPLUSC18柱和AgilentZORBAXSB-C18柱對(duì)樣品進(jìn)行分離，結(jié)果顯示，在相同的流動(dòng)相條件下，2種柱子的赤霉素都能得到分離，而使用AgilentZOR