土貝母苷甲誘導(dǎo)k562細(xì)胞分化的實驗研究

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1、湛江海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文土貝母苷甲誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化的實驗研究姓名：高營申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)品加工及貯藏工程指導(dǎo)教師：于立堅;馬潤娣20040601獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果盡我所知除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果也不包含為獲得本校或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意研究生簽名時間年月日2英文縮略語BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白DMSOdimethylsulphoxide二甲基亞

2、砜DTTDithiothreitol二硫蘇糖醇EDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸EPOErythropoietin紅細(xì)胞生成素EPO-Rerythropoietinreceptor紅細(xì)胞生成素受體HbHemoglobin血紅蛋白HGFhematopoieticgrowthfactor造血生長因子HSChematopoieticstemcell多能造血干細(xì)胞K562erythroleukemiacellline人紅白血病細(xì)胞株P(guān)AGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝膠電泳PASperiodicacid-s

3、chiffreaction過碘酸雪夫反應(yīng)PBSphosphatebufferedsaline磷酸鹽緩沖溶液PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟POXMyeloperoxidase髓過氧化物酶SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸鈉SDS-PAGESDS-polyacrylamidegelelectrophoresisSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳TEMEDN,N,N’,N’,-tetramethylethylenediamineN,N,N’,N’-四甲基乙二胺á-NAEá-naphthylacetateesteraseá醋酸萘酯4土貝母

4、苷甲誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化的實驗研究研究生高營導(dǎo)師于立堅研究員馬潤娣研究員湛江海洋大學(xué)廣東省海洋藥物重點實驗室摘要背景與目的白血病是嚴(yán)重危害人類生命健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤其生物學(xué)特征是造血細(xì)胞增殖失控分化成熟受阻正常凋亡過程發(fā)生障礙以致異常分化的細(xì)胞大量增殖迄今白血病的治療仍主要采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療但此療法副作用甚大復(fù)發(fā)率很高尤其對機(jī)體免疫與造血系統(tǒng)有極大損害研究惡性腫瘤尤其是白血病細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及逆轉(zhuǎn)機(jī)制已成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)最熱點的前沿課題之一在眾多的研究中中藥以其增強(qiáng)免疫功能攻補(bǔ)兼施毒副作用小注意整體應(yīng)用范圍廣泛的優(yōu)越性得到了廣泛認(rèn)可和重視從祖國醫(yī)學(xué)寶庫中尋找出既能促進(jìn)正常造血又能

5、抑制白血病細(xì)胞惡性增殖并誘導(dǎo)其向成熟方向分化的天然誘導(dǎo)分化劑已成為白血病的希望和重要途徑人紅白血病細(xì)胞株K562是1975年由Lozzio等從慢性髓性白血病急變期的病人胸水中獲得并建株的該細(xì)胞起源于骨髓原始多能干細(xì)胞1979年Anderson等研究了K562細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)有人骨髓紅細(xì)胞上特有的糖蛋白故認(rèn)為該細(xì)胞株屬人紅白血病細(xì)胞在藥物等誘導(dǎo)因素作用下可向紅系粒系和巨核系細(xì)胞分化是研究細(xì)胞增殖與分化的理想模型土貝母[BolbostemmapaniculatumMaxim.Franquet(Cucurbitaceae)]是一種傳統(tǒng)中藥載于清代趙學(xué)敏編著的本草綱目拾遺古代用它的塊莖來治療乳巖乳

6、癰乳腺增生和瘰疬等疾患四川省和陜西省的老中醫(yī)用它來治療食道癌和胃癌效果顯著但因惡心嘔吐等消化道副作用而限制了它的臨床應(yīng)用我們從1978年開始從生藥土貝母中分離純化抗癌活性成分并對其中得率最高1.9%水溶性和穩(wěn)定性較好的土貝母苷甲的藥效學(xué)藥代動力學(xué)毒理學(xué)及其作用機(jī)制進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究5本文試圖研究土貝母苷甲對K562細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用并探討其可能的機(jī)理方法1.采用臺盼藍(lán)拒染法研究土貝母苷甲對K562細(xì)胞增殖的影響2.通過瑞氏吉姆薩染色光鏡觀察研究經(jīng)土貝母苷甲誘導(dǎo)后K562細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變3.細(xì)胞化學(xué)染色檢測細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白過氧化物酶糖原及非特異性酯酶含量的變化4.Westernblotting法

7、檢測經(jīng)土貝母苷甲誘導(dǎo)后K562細(xì)胞基因c-mycc-fos表達(dá)蛋白產(chǎn)物的變化結(jié)果:-11.通過土貝母苷甲作用K562細(xì)胞的濃度時間曲線發(fā)現(xiàn)410ìmol·L土-1貝母苷甲能抑制K562細(xì)胞的增殖810ìmol·L土貝母苷甲作用3天后細(xì)胞出現(xiàn)死亡細(xì)胞增殖受抑明顯2.形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)土貝母苷甲誘導(dǎo)后K562細(xì)胞核漿比例減小核內(nèi)異染色質(zhì)增多胞漿內(nèi)特殊顆粒增多細(xì)胞趨向成熟分化3.細(xì)胞化學(xué)檢測顯示經(jīng)土貝母苷甲誘導(dǎo)后K5