流感病毒與呼吸道合胞病毒雙重感染balbc小鼠的研究

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1、也文《曲如皆爭(zhēng)供中刮《獻(xiàn)博：ｔ研究生學(xué)位論義北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院學(xué)校代碼：１００２３學(xué)號(hào)：Ｂ２０１２０１８００６博±學(xué)位論文流感病毒與呼吸道合胞病毒雙重感染ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的研究ＴｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｉ打ＤｕａｌＩｎｆｅｃｔｗｉｔｈＩｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓａｎｄＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓｏｎＢＡＬＢ／ｃ所院；醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所姓名：馮凱指導(dǎo)教師；劉龍下教授導(dǎo)師小沮；李埼涵教授王晶晶郭磊學(xué)

2、科專業(yè)：免疫學(xué)研究方向：病毒免疫學(xué)完成日期：２０１５年４月‘＇ｉ‘：：：院叫儀：院帖北扣帖和陽(yáng)７Ｎ７巧７Ｉ；研兒ｋ７Ｒ論摘要１Ｓｕｍｍａｒｙ３１Ｍｍ５１１．流感病毒的感染機(jī)制及分離培養(yǎng)７１．２呼吸道合胞病毒的感染機(jī)制及分離培養(yǎng)９１．３病毒感染的細(xì)胞免疫機(jī)制１２１．４ＴｈｌＴｈ２Ｔｈｌ７和Ｔｒｅ細(xì)胞１３，，ｇ１．５實(shí)驗(yàn)思路１４一第部分病奉的準(zhǔn)備巧１實(shí)驗(yàn)腿及方法１５１．１＃料１５１丄１１５病毒１丄２設(shè)各

3、和儀器巧１．２試驗(yàn)方法１５．１２．１細(xì)胞及培養(yǎng)體系１５１．２．２ＰＲ８病毒葦種在雞胚中擴(kuò)増１６１．２．３血巧抑制實(shí)駭（ＨＡｅｓｔ）１７ｔ滴定病毒血凝效價(jià)１．２．４細(xì)施復(fù)蘇及擴(kuò)増１７１．２．５Ｖｅｒｏ細(xì)胞擴(kuò)増流感病毒１８１２６Ｈｅ－２ＳＶ１８．．ｐ細(xì)施擴(kuò)増Ｒ毒種．１．２７Ｖｅｒｏ細(xì)胞擴(kuò)増ＲＳＶ病毒１８１．２．８病毒ＣＣＩＤｓｏ的檢測(cè)１９１．２．８．１ＰＲ８ＣＣ用ＭＤＣＫＩＤ１９細(xì)胞測(cè)定的ｓｏ１－．２．８．２用Ｈｅ２

4、ＲＳＶＣ曰Ｄ２０ｐ細(xì)胞測(cè)定的ｓｏ１．３結(jié)果２０ＩＤ血凝效價(jià)１．３．１ＰＲ８ＣＣｓｏ及２０１ＲＳＶＣＣＩＤ２１．３．２ｓｏ１４．小結(jié)２２第二部分Ｈ１Ｎ１和ＲＳＶ雙重感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的研巧２３２４１實(shí)驗(yàn)材料及方法１．１材料２４１．１．１試劑耗材及試劑盒２４１．１．２實(shí)驗(yàn)動(dòng)物２４．．３巧１１病毒和攻毒劑量１丄４儀器設(shè)備２５１．２實(shí)驗(yàn)方法２５１．２．１動(dòng)物分組２５１．２．２攻毒方法２５１．２．３小鼠腹腔

5、主動(dòng)脈采血，取脾臟２６１．２．４小鼠脾淋巴細(xì)胞分離２７１．２．５淋己細(xì)胞表面舒＃２８１．２．６小鼠肺灌洗液ＢＡＬＦ收集及細(xì)胞涂片制備巧１．２．７ＢＡＬＦ中細(xì)胞因子檢測(cè)巧１．２．８小鼠肺組織獲取及固定２９１１：北成化和醫(yī)巧院；１１護(hù)７科巧院晚．：１；｜中１研究巧化皮義１－２．９小鼠肺組織切片及ＨＥ染色巧１．２．１０小鼠肺組織懸液制備３１．．１１２１懂斑法檢測(cè)肺懸液的病奉３１１．２．１２ＲＮＡ２小鼠肺總提?。墸常保玻保巢《荆遥危撂崛。?/p>

6、３３１４－ＰＣＲ．２．１普通ＲＴ檢測(cè)肺部病毒３３１．２．１５病毒檢測(cè)弓Ｉ物及探針３３ｙ定量引物及探針設(shè)計(jì)３３２性和靈敏性３４）引物和探針的榜異１．２．１６病奉拷貝數(shù)定量參考標(biāo)準(zhǔn)品ＲＮＡ制備３４ｙ基因片段選擇和引物設(shè)計(jì)３４２Ｔ７啟動(dòng)巧）子序列構(gòu)建３參考標(biāo)準(zhǔn)品ＲＮＡ體外轉(zhuǎn)錄及純化化）１．２．１７小鼠肺組織病毒載量檢測(cè)１．２．：１８病毒拷貝數(shù)計(jì)算３７１．２．巧小鼠呼吸道病理切片制備３８１．２．２０病理切片化染色３８．１２．２１石蠟切

7、片免疫組化（ＩＨＣ）檢測(cè)抗原巧４０１．３娜及分析１．３．１小鼠表現(xiàn)及體重檢測(cè)４０１．３．２病原學(xué)分析４１１．３．２．１雙重感染的鮮４１１．３．２．２病春觀檢測(cè)４２１．３．３小鼠肺石蠟切片ＨＥ染色分化免疫組化檢測(cè)病毒４４１．３．４病理研巧小結(jié)：５３１３ｈ．．５淋己細(xì)胞及Ｔ細(xì)胞亞群的免疫機(jī)制５６１．３．５．１ＣＤ３＋，ＣＤ４＋，ＣＤ８＋細(xì)胞化例５７１．３．５．２ＴｈｌＴｈ２５８和細(xì)胞１．３．５．３Ｔｈｌ７細(xì)胞比例分析５９１

8、．３．５．４Ｔｒｅｇ細(xì)胞比例分析６０１．３．６ＢＡＬＦ中細(xì)胞因子濃度５４；１．４討ｉ＆６１１．４．１病奉性呼吸道感染的常見(jiàn)臨床癥狀６１１．４．２雙重感染中的抗病辜免疫機(jī)制６４１．４．３Ｔｈ亞群相關(guān)性分析５９１．５小結(jié)７１參考文獻(xiàn)７２縣８４Ｉ主要溶液配制ＩＩ北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博±研巧生學(xué)位論文摘要呼吸道感染是臨床常見(jiàn)疾病，在眾多病原體中能導(dǎo)致呼吸道急性炎癥并