流感病毒與呼吸道合胞病毒雙重感染balbc小鼠的研究

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1、也文《曲如皆爭供中刮《獻博：ｔ研究生學位論義北京協(xié)和醫(yī)學院研究生院學校代碼：１００２３學號：Ｂ２０１２０１８００６博±學位論文流感病毒與呼吸道合胞病毒雙重感染ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的研究ＴｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｉ打ＤｕａｌＩｎｆｅｃｔｗｉｔｈＩｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓａｎｄＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓｏｎＢＡＬＢ／ｃ所院；醫(yī)學生物學研究所姓名：馮凱指導教師；劉龍下教授導師小沮；李埼涵教授王晶晶郭磊學

2、科專業(yè)：免疫學研究方向：病毒免疫學完成日期：２０１５年４月‘＇ｉ‘：：：院叫儀：院帖北扣帖和陽７Ｎ７巧７Ｉ；研兒ｋ７Ｒ論摘要１Ｓｕｍｍａｒｙ３１Ｍｍ５１１．流感病毒的感染機制及分離培養(yǎng)７１．２呼吸道合胞病毒的感染機制及分離培養(yǎng)９１．３病毒感染的細胞免疫機制１２１．４ＴｈｌＴｈ２Ｔｈｌ７和Ｔｒｅ細胞１３，，ｇ１．５實驗思路１４一第部分病奉的準備巧１實驗腿及方法１５１．１＃料１５１丄１１５病毒１丄２設各

3、和儀器巧１．２試驗方法１５．１２．１細胞及培養(yǎng)體系１５１．２．２ＰＲ８病毒葦種在雞胚中擴増１６１．２．３血巧抑制實駭（ＨＡｅｓｔ）１７ｔ滴定病毒血凝效價１．２．４細施復蘇及擴増１７１．２．５Ｖｅｒｏ細胞擴増流感病毒１８１２６Ｈｅ－２ＳＶ１８．．ｐ細施擴増Ｒ毒種．１．２７Ｖｅｒｏ細胞擴増ＲＳＶ病毒１８１．２．８病毒ＣＣＩＤｓｏ的檢測１９１．２．８．１ＰＲ８ＣＣ用ＭＤＣＫＩＤ１９細胞測定的ｓｏ１－．２．８．２用Ｈｅ２

4、ＲＳＶＣ曰Ｄ２０ｐ細胞測定的ｓｏ１．３結(jié)果２０ＩＤ血凝效價１．３．１ＰＲ８ＣＣｓｏ及２０１ＲＳＶＣＣＩＤ２１．３．２ｓｏ１４．小結(jié)２２第二部分Ｈ１Ｎ１和ＲＳＶ雙重感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的研巧２３２４１實驗材料及方法１．１材料２４１．１．１試劑耗材及試劑盒２４１．１．２實驗動物２４．．３巧１１病毒和攻毒劑量１丄４儀器設備２５１．２實驗方法２５１．２．１動物分組２５１．２．２攻毒方法２５１．２．３小鼠腹腔

5、主動脈采血，取脾臟２６１．２．４小鼠脾淋巴細胞分離２７１．２．５淋己細胞表面舒＃２８１．２．６小鼠肺灌洗液ＢＡＬＦ收集及細胞涂片制備巧１．２．７ＢＡＬＦ中細胞因子檢測巧１．２．８小鼠肺組織獲取及固定２９１１：北成化和醫(yī)巧院；１１護７科巧院晚．：１；｜中１研究巧化皮義１－２．９小鼠肺組織切片及ＨＥ染色巧１．２．１０小鼠肺組織懸液制備３１．．１１２１懂斑法檢測肺懸液的病奉３１１．２．１２ＲＮＡ２小鼠肺總提取３１．２．１３病毒ＲＮＡ提?。?/p>

6、３３１４－ＰＣＲ．２．１普通ＲＴ檢測肺部病毒３３１．２．１５病毒檢測弓Ｉ物及探針３３ｙ定量引物及探針設計３３２性和靈敏性３４）引物和探針的榜異１．２．１６病奉拷貝數(shù)定量參考標準品ＲＮＡ制備３４ｙ基因片段選擇和引物設計３４２Ｔ７啟動巧）子序列構(gòu)建３參考標準品ＲＮＡ體外轉(zhuǎn)錄及純化化）１．２．１７小鼠肺組織病毒載量檢測１．２．：１８病毒拷貝數(shù)計算３７１．２．巧小鼠呼吸道病理切片制備３８１．２．２０病理切片化染色３８．１２．２１石蠟切

7、片免疫組化（ＩＨＣ）檢測抗原巧４０１．３娜及分析１．３．１小鼠表現(xiàn)及體重檢測４０１．３．２病原學分析４１１．３．２．１雙重感染的鮮４１１．３．２．２病春觀檢測４２１．３．３小鼠肺石蠟切片ＨＥ染色分化免疫組化檢測病毒４４１．３．４病理研巧小結(jié)：５３１３ｈ．．５淋己細胞及Ｔ細胞亞群的免疫機制５６１．３．５．１ＣＤ３＋，ＣＤ４＋，ＣＤ８＋細胞化例５７１．３．５．２ＴｈｌＴｈ２５８和細胞１．３．５．３Ｔｈｌ７細胞比例分析５９１

8、．３．５．４Ｔｒｅｇ細胞比例分析６０１．３．６ＢＡＬＦ中細胞因子濃度５４；１．４討ｉ＆６１１．４．１病奉性呼吸道感染的常見臨床癥狀６１１．４．２雙重感染中的抗病辜免疫機制６４１．４．３Ｔｈ亞群相關(guān)性分析５９１．５小結(jié)７１參考文獻７２縣８４Ｉ主要溶液配制ＩＩ北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院博±研巧生學位論文摘要呼吸道感染是臨床常見疾病，在眾多病原體中能導致呼吸道急性炎癥并