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《褐藻膠酶解寡糖的制備、分離和結構鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國海洋大學碩士學位論文褐藻膠酶解寡糖的制備、分離和結構鑒定姓名：張真慶申請學位級別：碩士專業(yè)：生藥學指導教師：管華詩2003.6.1酶解褐藻膠寡糖的制備、分離和結構鑒定摘要目的：本論文利用菌株Vibrio510產生的褐藻膠裂解酶降解褐藻膠，探討酶解得到褐藻膠寡糖的生產工藝，及分離純化褐藻膠寡糖以得到相應標準品從而豐富海洋寡糖庫，以此為基本目的和出發(fā)點，并且為探討該褐藻膠裂解酶酶解行為、酶解位點，做先期的工作。方法：應用紫外法與DNS法對該褐藻膠裂合酶的酶活進行測定。應用紫外掃描法、凝膠滲透色譜技術(HPGPc——TSKG2500PWxL)和聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PA
2、GE)對不同時間酶解產物組分的分子量及相對含量加以分析。對酶解寡糖進行分離純化：應用凝膠過濾色譜法(Bio．GelP一4；P．6)、陰離子交換色譜法(Q。Sepharose．FastFlow)，其問應用新技術——快速液相色譜儀(FPLC)對分離條件進行優(yōu)化和確定。對所得寡糖應用灌注色譜技術(HQ．20)檢測其純度。并應用此方法進一步純化；同時運用熒光輔助糖電泳(FACE)和高效毛細管電泳(HPCE)技術作為進一步檢測純度的方法。應用ESI—MS、NMR等對得到的寡糖進行結構鑒定。結果：本文應用紫外法和DNS法對該酶的酶活進行檢測，從海藻中篩選出的菌株Vibrio510
3、所產褐藻膠裂解酶有較高的比活力：22，5unit／mL。HPGPC和PAGE方法對褐藻膠的降解程度有良好的檢測效果，快捷、高分辨率和直觀是這兩種方法的共同點。凝膠滲透色譜與陰離子交換色譜均對褐藻膠寡糖有良好的分離效果，得到四個組分。經灌注層析進一步純化，應用FACE和HPCE檢N-糖為一結構單一的化合物，三糖到五糖＼，、-———一～‘～——，“’—一均有異構體的存在。應用ESI．MS確證四個組分分別為二糖到五糖，且聚合度單、、_，‘、—··-——’，一一。同時對結構單一的二糖利用1H．NMR，”C—NMR，1H13CHMQC和1H-1HCOSY進行了結構的確定——非還
4、原端存在雙鍵的古羅糖醛酸二糖。討論：一方、、，～、—，—、—／，—'————一、、一．—／一面，通過進一步的分離純化得到單一結構的化合物，在對單體結構進行分析確定的同時，所得結果將會為酶解行為特點的確定提供必要的信息，以便于對酶解工藝作進一步的指導：另一方面得到較高聚合度的寡糖，并進行活性的篩選。關鍵詞：褐藻膠裂解酶寡糖分離純化結構分析Preparation，IsolationandStructureelucidationofalginateoligomersdegradedbythealginateiyaseAbstractTlliSthesismainlyinvo
5、lvedtheproducingtechnicsandpreparationofalginateoligomersdegradedbyanalginatelyase．whichwasproducedbyastainV／brio510selectedfromalgae．asmarkers．Anotheraimofpreparationisenrichmentoflibraryofmarineoligosaccharides．Atthesametimeisolationpurificationandstructureconfirmingoftheseblocksisthe
6、firststageofdeterminationofactionpatternofthelyase．Thealginatelyasehashigherspecificactivityof22．5unit／mL．AnalysisofthedegreeofdegradationbyUVscan，HPGPCandPAGE，analysisofsamples’molecularandpercentofeveryfractionbyHPGPC，inwhichseriesTSKG3000PWxlandTSKG2500PWxI．wasapplied，arethefoundatio
7、nofproducingtechnicsofalginateoligomers．Isolationandpurificationofalgmmeoligomers：Gelfilterchromato腳hy(Bio—GelP-4，P-6)andanionexchangechromatography(Q—sepharoseFast．Flow)wereapplied，inwhichfastperformanceliquidcllromato鱸印hy(FPLC)wasappliedandtherearegoodresults．Fourblocks(dp：2-
