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《立枯絲核菌AG1IA誘導玉米差異蛋白的分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、四川農業(yè)大學碩士學位論文立枯絲核菌AG1-IA誘導玉米差異蛋白的分析姓名：李蕓申請學位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：潘光堂20080501摘要紋枯病是玉米的一種重要病害，由立枯絲核菌RhizoctoniasolaniKilhn引起，由于該病害危害玉米近地面幾節(jié)的葉鞘和莖桿，引起莖基腐敗，破壞輸導組織，影響水分和營養(yǎng)的輸送，因此造成的損失較大。近年來在我國表現出加重和蔓延的趨勢，目前該病已作為國內抗病育種的目標。利用常規(guī)育種方法選育抗病品種，不僅育種周期長，并且育種周期內由于病原菌的流行，
2、生理小種致病性以及植物與病原菌的互作關系都容易改變。因此利用新技術深入研究玉米對紋枯病的感病和抗病機制，對于從機理上解決植物病害問題具有重要意義。本研究采用本課題組多年篩選鑒定出的高耐玉米紋枯病材料R15和高感材料掖478，紋枯病菌為立枯絲核菌高致病性融合菌群AGl．IA。溫室培育至拔節(jié)期，采用人工嵌入法將兩粒布滿菌絲的麥粒接種到植株下位第三葉鞘，分別取接種后12h、24h、36h、48h、72h的玉米第三下位的葉片為處理材料，未接菌同位葉為對照材料，提取總蛋白。接茵后的不同發(fā)病癥狀表明R15對
3、病原菌具有較好的抵抗性，其侵染時間大約在接菌后24h左右，大面積侵染時間大約在接菌后48h左右。而掖478對病原菌抵抗力較差，在接菌后12h之后就已經被侵染，并在24h時已經表現出擴大侵染癥狀，36h'--'48h是大面積侵染時期。這一結果與本課題組的其他研究結果基本一致。本次試驗對蛋白質雙向電泳體系進行了部分優(yōu)化：在裂解液中加入硫脲增強了蛋白的可溶性；反復的沉淀洗滌和鹽橋的應用減少了鹽分的影響；用梯度濃度的標準蛋白代替梯度體積進行定量減少了試驗誤差等。經過電泳分析，從2一DE圖譜上找到了15個
4、感興趣的差異表達蛋白點。通過基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術獲得肽質量指紋圖譜，數據庫搜索比對后，初步鑒定出高于閾值的5個點和其他一些相關的有功能的點：增量表達的莽草酸激酶I、細胞分裂素受體組氨酸激酶、鐵氧一硫氧蛋自還原酶催化亞基(FTR．C)和細胞分裂周期蛋自48(CDC48)；減量表達的磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶大亞基、光合系統(tǒng)I反應中心N亞基和ATP合成酶CFl．a亞基。莽草酸激酶與芳香族氨基酸合成有關，其增量表達可以使玉米植株合成更多的類黃酮、木質素等物質，增強植株抗病性。細胞分裂素和
5、乙烯信號傳導途徑存在部分重疊的通路，相信被侵染后，細胞分裂素的增加能引發(fā)部分乙烯抗病系統(tǒng)。FTR是一個普遍存在的氧化還原系統(tǒng)，在抗氧化和氧化還原調節(jié)中起關鍵作用，植物能通過增加FTR來清除病菌侵染后爆發(fā)的活性氧。因為這些蛋白在R15中的增量表達高于掖478，因此R15抗病性高于掖478。CDC48參與內質網相關蛋白的降解，表明玉米在受侵染后細胞器開始被破壞。磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶是植物光合作用過程中固定C0：的關鍵酶，參與植物體內的碳素循環(huán)；ATP合成酶參與電子傳遞，是細胞內能量轉換的核心酶；
6、光合系統(tǒng)I蛋白質分子負責利用光能把二氧化碳轉變成碳和氧氣，吸收光能傳遞電了。掖478中這些蛋白的減量表達趨勢比R15明顯，表明掖478在受立枯絲核菌AGI-IA侵染后，物質和能量代謝受到的抑制甚至破壞比R15嚴重，因此病情更重。綜上表明玉米在感病后，能增量表達某些抗病蛋白或誘導某些抗病系統(tǒng)的啟動，但同時物質和能量代謝途徑也有～定程度的抑制，細胞器被破壞。結合接菌后的病斑不斷擴大的結果，可以知道感病玉米植株隨著病癥的加重，抗病能力的加強趨勢不及代謝的減弱趨勢，使植株衰弱而無法抵抗病原菌的侵染，最終
7、導致植株感病死亡。關鍵詞：玉米紋枯病AGl．IA蛋白質雙向電泳ABSTRACTMaizebaIldedleafandsheathblight(BLSB)iscausedbyRhizoctoniasolaniKrahnalld15themostdes仃uctivediseaseofMaize．ThediseaseharmsMaizenearthegroundsectionsoftheleafshe砒a11dstem，causescorruptionofcaudex，ruinsconducamgti
8、ssue，affectsthetransportionofwaterandnutrition，SOitresultsinsignificantyieldloss·ItincreasedandspreadedinrecentyearsinChina．Andthediseasehasbeenthetargetofdomesticdiseaseresistancebreeding．ThebreedingcycleofconventionalmethodstoselectresistantV踟etles
