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《立枯絲核菌AG1IA誘導(dǎo)玉米差異蛋白的分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文立枯絲核菌AG1-IA誘導(dǎo)玉米差異蛋白的分析姓名：李蕓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：潘光堂20080501摘要紋枯病是玉米的一種重要病害，由立枯絲核菌RhizoctoniasolaniKilhn引起，由于該病害危害玉米近地面幾節(jié)的葉鞘和莖桿，引起莖基腐敗，破壞輸導(dǎo)組織，影響水分和營(yíng)養(yǎng)的輸送，因此造成的損失較大。近年來(lái)在我國(guó)表現(xiàn)出加重和蔓延的趨勢(shì)，目前該病已作為國(guó)內(nèi)抗病育種的目標(biāo)。利用常規(guī)育種方法選育抗病品種，不僅育種周期長(zhǎng)，并且育種周期內(nèi)由于病原菌的流行，
2、生理小種致病性以及植物與病原菌的互作關(guān)系都容易改變。因此利用新技術(shù)深入研究玉米對(duì)紋枯病的感病和抗病機(jī)制，對(duì)于從機(jī)理上解決植物病害問(wèn)題具有重要意義。本研究采用本課題組多年篩選鑒定出的高耐玉米紋枯病材料R15和高感材料掖478，紋枯病菌為立枯絲核菌高致病性融合菌群AGl．IA。溫室培育至拔節(jié)期，采用人工嵌入法將兩粒布滿(mǎn)菌絲的麥粒接種到植株下位第三葉鞘，分別取接種后12h、24h、36h、48h、72h的玉米第三下位的葉片為處理材料，未接菌同位葉為對(duì)照材料，提取總蛋白。接茵后的不同發(fā)病癥狀表明R15對(duì)
3、病原菌具有較好的抵抗性，其侵染時(shí)間大約在接菌后24h左右，大面積侵染時(shí)間大約在接菌后48h左右。而掖478對(duì)病原菌抵抗力較差，在接菌后12h之后就已經(jīng)被侵染，并在24h時(shí)已經(jīng)表現(xiàn)出擴(kuò)大侵染癥狀，36h'--'48h是大面積侵染時(shí)期。這一結(jié)果與本課題組的其他研究結(jié)果基本一致。本次試驗(yàn)對(duì)蛋白質(zhì)雙向電泳體系進(jìn)行了部分優(yōu)化：在裂解液中加入硫脲增強(qiáng)了蛋白的可溶性；反復(fù)的沉淀洗滌和鹽橋的應(yīng)用減少了鹽分的影響；用梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白代替梯度體積進(jìn)行定量減少了試驗(yàn)誤差等。經(jīng)過(guò)電泳分析，從2一DE圖譜上找到了15個(gè)
4、感興趣的差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。通過(guò)基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)獲得肽質(zhì)量指紋圖譜，數(shù)據(jù)庫(kù)搜索比對(duì)后，初步鑒定出高于閾值的5個(gè)點(diǎn)和其他一些相關(guān)的有功能的點(diǎn)：增量表達(dá)的莽草酸激酶I、細(xì)胞分裂素受體組氨酸激酶、鐵氧一硫氧蛋自還原酶催化亞基(FTR．C)和細(xì)胞分裂周期蛋自48(CDC48)；減量表達(dá)的磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶大亞基、光合系統(tǒng)I反應(yīng)中心N亞基和ATP合成酶CFl．a(chǎn)亞基。莽草酸激酶與芳香族氨基酸合成有關(guān)，其增量表達(dá)可以使玉米植株合成更多的類(lèi)黃酮、木質(zhì)素等物質(zhì)，增強(qiáng)植株抗病性。細(xì)胞分裂素和
5、乙烯信號(hào)傳導(dǎo)途徑存在部分重疊的通路，相信被侵染后，細(xì)胞分裂素的增加能引發(fā)部分乙烯抗病系統(tǒng)。FTR是一個(gè)普遍存在的氧化還原系統(tǒng)，在抗氧化和氧化還原調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，植物能通過(guò)增加FTR來(lái)清除病菌侵染后爆發(fā)的活性氧。因?yàn)檫@些蛋白在R15中的增量表達(dá)高于掖478，因此R15抗病性高于掖478。CDC48參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白的降解，表明玉米在受侵染后細(xì)胞器開(kāi)始被破壞。磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶是植物光合作用過(guò)程中固定C0：的關(guān)鍵酶，參與植物體內(nèi)的碳素循環(huán)；ATP合成酶參與電子傳遞，是細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)換的核心酶；
6、光合系統(tǒng)I蛋白質(zhì)分子負(fù)責(zé)利用光能把二氧化碳轉(zhuǎn)變成碳和氧氣，吸收光能傳遞電了。掖478中這些蛋白的減量表達(dá)趨勢(shì)比R15明顯，表明掖478在受立枯絲核菌AGI-IA侵染后，物質(zhì)和能量代謝受到的抑制甚至破壞比R15嚴(yán)重，因此病情更重。綜上表明玉米在感病后，能增量表達(dá)某些抗病蛋白或誘導(dǎo)某些抗病系統(tǒng)的啟動(dòng)，但同時(shí)物質(zhì)和能量代謝途徑也有～定程度的抑制，細(xì)胞器被破壞。結(jié)合接菌后的病斑不斷擴(kuò)大的結(jié)果，可以知道感病玉米植株隨著病癥的加重，抗病能力的加強(qiáng)趨勢(shì)不及代謝的減弱趨勢(shì)，使植株衰弱而無(wú)法抵抗病原菌的侵染，最終
7、導(dǎo)致植株感病死亡。關(guān)鍵詞：玉米紋枯病AGl．IA蛋白質(zhì)雙向電泳ABSTRACTMaizebaIldedleafandsheathblight(BLSB)iscausedbyRhizoctoniasolaniKrahnalld15themostdes仃uctivediseaseofMaize．ThediseaseharmsMaizenearthegroundsectionsoftheleafshe砒a11dstem，causescorruptionofcaudex，ruinsconducamgti
8、ssue，affectsthetransportionofwaterandnutrition，SOitresultsinsignificantyieldloss·ItincreasedandspreadedinrecentyearsinChina．Andthediseasehasbeenthetargetofdomesticdiseaseresistancebreeding．ThebreedingcycleofconventionalmethodstoselectresistantV踟etles
