組織切片石蠟切片過程

《組織切片石蠟切片過程》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、石蠟切片過程一、石蠟包埋:1.脫水：組織水洗后便可酒精脫水，70%→80%→90%→95%→100%酒精（無水乙醇）→100%酒精，各級(jí)酒精脫水時(shí)間30-45min。（注意：80%酒精內(nèi)組織可留之較久，當(dāng)天如果來不及做完就可以暫時(shí)保存一晚上，次日再繼續(xù)做下去。70%的酒精可作為更久的保存劑。）2.透蠟：脫水后組織：50%酒精+50%二甲苯30-45min.二甲苯（組織透明即可停止)15min.50%二甲苯+50%石蠟20-30min.純石蠟145min.純石蠟245min.（透臘之前做好準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)

2、備臘杯，烘箱溫度保持55—60℃左右，使石臘熔化，溫度不宜過高，以免使組織發(fā)脆。）3.包埋：a.折好紙盒，準(zhǔn)備小鑷子、酒精燈、解剖針、冷水等。b.用溫?zé)嵛芪∈炞⑷爰埡?。等待底稍微凝固，溫鑷子夾住樣品放入盒子中央，面朝底(可以將蠟一次倒入紙盒，然后待蠟表面起膜后，用溫鑷子夾住樣品放入蠟中，待冷卻即可，整個(gè)操作過程中，切勿讓蠟中起氣泡)。c.兩手拿著兩端，入冷水一半，吹氣，使表面石蠟形成移較厚臘層，然后急速全部進(jìn)入冷水中3分鐘。d.修正蠟塊（上下兩個(gè)面一定要平行并且光滑）e.固著蠟塊二、切片1.切

3、片（切片時(shí)，可以在刀片以及刀片周圍涂上一點(diǎn)甘油）2.貼片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2雞蛋清）（在貼片時(shí)，用細(xì)吸管取一點(diǎn)點(diǎn)甘油蛋白（越少越好）于載玻片上，然后用手抹勻，手一定要干凈。將切片放在載玻片（光亮面朝向下），然后滴幾滴冷水使切片懸于水上。接著將載玻片放在37℃上烘烤。常見問題分析：1.切片分離不能形成蠟帶：?室溫過低，蠟過硬。2.蠟帶彎曲：?蠟塊口下面不平行，或蠟塊不與刀刃平行所致。3.切片厚薄不一:?切片刀或蠟塊未固定緊。4.切成片后，組織與蠟塊脫離：?脫水不干凈等。5.蠟片易粘在切片

4、上或蠟片萎縮：?室溫太高或蠟太軟或刀的角度太小。6.切片破裂：?浸蠟不足或浸蠟溫度過高，或在脫水劑、透明劑中時(shí)間過長(zhǎng)，引起組織發(fā)脆或有雜質(zhì)，材料脫鈣不完全，此種無法補(bǔ)救。7.蠟片上卷，切過刀口即破裂：?刀口太鈍或沾有石蠟或刀的角度過大或蠟太硬。*：包埋時(shí)，時(shí)間長(zhǎng)會(huì)使標(biāo)本變質(zhì)，過短則石蠟不能透進(jìn)標(biāo)本。石蠟包埋過程中，注意控制溫度保持在58-60℃，石蠟不能融化。三、染色二甲苯脫蠟（1）10----15分鐘二甲苯脫蠟（2）10----15分鐘1/2二甲苯+1/2100%酒精3-----5分鐘100%酒精

5、10分鐘95%酒精10分鐘80%酒精10分鐘70%酒精10分鐘50%酒精10分鐘蒸餾水洗1-------3分鐘蘇木精染色10-------15分鐘自來水沖洗3-------5分鐘或者更長(zhǎng)伊紅（曙紅）復(fù)染色3-------5分鐘或者1---2分鐘70%酒精1-------2分鐘80%酒精1------2分鐘95%酒精（1）1------2分鐘95%酒精（2）1-------2分鐘100%酒精（1）1-------2分鐘100%酒精（2）1--------2分鐘二甲苯（1）5二甲苯（2）5封片