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《蛋白質(zhì)分離純化和蛋白質(zhì)結(jié)晶的研究方法_姚知淵》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、企業(yè)技術(shù)開發(fā)2009年10月第28卷TECHNOLOGICALDEVELOPMENTOFENTERPRISE企企業(yè)技術(shù)開發(fā)業(yè)技術(shù)開發(fā)2009Oct.2009年10月蛋白質(zhì)分離純化和蛋白質(zhì)結(jié)晶的研究方法姚知淵1,周浩鵬2,周靜舫3(1.臨沂出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東臨沂250100;2.菏澤學(xué)院,山東菏澤274000;3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,湖北武漢430070)摘要：文章主要對(duì)蛋白質(zhì)的分離純化的各種原理和方法作了簡(jiǎn)要的概述，同時(shí)簡(jiǎn)單的介紹了蛋白質(zhì)結(jié)晶的方法及影響因素。關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì);分離純化;結(jié)晶中圖分類號(hào)：Q5
2、1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1006-8937（2009）19-0046-03Studiesonseparationandpurificationcrystallizationofprotein123YAOZhi-yuan,ZHOUHao-peng,ZHOUJing-fang（1.TechnicalCentreofAnimalandPlantQuarantineInspection,Linyi,Shandong250100,China;HezeUniversity,Heze,Shandong274000,China;
3、CollegeofFoodScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan,Hubei430070,China)Abstract:Inthispaper,itsummarizedthevariousprinciplesandmethodsofproteinseparationandpurification,andintroducedthemethodsandfactorsofproteincrystallizationatthesametime.Ke
4、ywords：protein;separation;purification;crystallization蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和質(zhì)分子的親水性，當(dāng)水中加入少量鹽時(shí)，鹽離子與水分子生物功能的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)在自然界中存在于復(fù)雜的混合對(duì)蛋白質(zhì)分子的極性基團(tuán)的影響，使蛋白質(zhì)在水中溶解體系中，而且許多重要的蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的含量極低。要度增大。但鹽濃度增加一定程度時(shí)，水的活度降低，蛋白把蛋白質(zhì)從復(fù)雜的體系中分離出來，同時(shí)又要防止其組質(zhì)表面的電荷大量被中和，水化膜被破壞，于是蛋白質(zhì)相成、結(jié)構(gòu)的改變和生物活性
5、的喪失，顯然是有相當(dāng)難度互聚集而沉淀析出。的。目前蛋白質(zhì)的分離純化技術(shù)的發(fā)展趨向于精細(xì)而多1.1.2等電點(diǎn)沉淀法樣化技術(shù)的綜合運(yùn)用，但基本原理均是以蛋白質(zhì)的性質(zhì)利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)為依據(jù)的。破碎組織細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)混合物，利用鹽析又具有不同的等電點(diǎn)來分離蛋白質(zhì)的方法，稱為等電點(diǎn)法、有機(jī)溶劑沉淀法等對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行粗提；電泳和色譜技沉淀法。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)即蛋白質(zhì)的凈電荷為零時(shí)的術(shù)則可對(duì)粗提蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，而且可對(duì)pH值，由于等電點(diǎn)時(shí)的蛋白質(zhì)凈電荷為零，因而失去了純化蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)
6、晶和制備。實(shí)際工作中應(yīng)按不同的要水化膜和分子間的相斥作用，疏水性氨基酸殘基暴露，蛋求和條件選用不同的方法。白質(zhì)分子相互靠攏、聚集，最后形成沉淀析出。1.1.3有機(jī)溶劑沉淀法1蛋白質(zhì)的分離純化有機(jī)溶劑沉淀法是指有機(jī)溶劑能使蛋白質(zhì)分子間極1.1粗提性基團(tuán)的靜電引力增加，與水作用能破壞蛋白質(zhì)的水化1.1.1鹽析沉淀法膜，而水化作用降低，促使蛋白質(zhì)聚集沉淀。常用的有機(jī)鹽析沉淀法是根據(jù)不同蛋白質(zhì)在一定濃度鹽溶液中溶劑是乙醇和丙酮，由于有機(jī)溶劑的加入易引起變性失溶解度降低程度不同達(dá)到彼此分離的方法。蛋白質(zhì)易溶活，尤其乙醇和水混
7、合釋放熱量，操作一般宜在低溫下進(jìn)于水，因?yàn)槠浞肿拥?COOH、-NH2和-OH都是親水基行，且在加入有機(jī)溶劑時(shí)注意攪拌均勻以免局部濃度過團(tuán)，這些基團(tuán)與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于大。用此法所析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉蛋白質(zhì)分子周圍形成1~100nm大小的親水膠體，從而削降。分離后的蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)立即用水或緩沖液溶解，以降弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。蛋白質(zhì)分子表面親水基低有機(jī)溶劑的濃度。團(tuán)越多，水化層越厚，蛋白質(zhì)分子與溶劑分子之間的親和1.2精提力就越大，因而溶解度也越大。親水膠體在水中的穩(wěn)定因1.2
8、.1層析(chromatography)素有兩個(gè)，即電荷和水膜。因?yàn)橹行喳}的親水性大于蛋白①離子交換柱層析。離子交換柱層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的體系進(jìn)行的。離子交換劑收稿日期：2009-07-11作者簡(jiǎn)介：姚知淵(1983-)，男，山東威海人，大學(xué)本科，科員，研究方有陽離子交換劑(如：羧甲基纖維素；CM-纖維素)和陰離向：動(dòng)植物檢疫。子交換
