資源描述：
《蛋白質(zhì)分離純化和蛋白質(zhì)結(jié)晶的研究方法_姚知淵》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、企業(yè)技術(shù)開發(fā)2009年10月第28卷TECHNOLOGICALDEVELOPMENTOFENTERPRISE企企業(yè)技術(shù)開發(fā)業(yè)技術(shù)開發(fā)2009Oct.2009年10月蛋白質(zhì)分離純化和蛋白質(zhì)結(jié)晶的研究方法姚知淵1,周浩鵬2,周靜舫3(1.臨沂出入境檢驗檢疫局,山東臨沂250100;2.菏澤學(xué)院,山東菏澤274000;3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,湖北武漢430070)摘要：文章主要對蛋白質(zhì)的分離純化的各種原理和方法作了簡要的概述，同時簡單的介紹了蛋白質(zhì)結(jié)晶的方法及影響因素。關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì);分離純化;結(jié)晶中圖分類號：Q5
2、1文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1006-8937（2009）19-0046-03Studiesonseparationandpurificationcrystallizationofprotein123YAOZhi-yuan,ZHOUHao-peng,ZHOUJing-fang（1.TechnicalCentreofAnimalandPlantQuarantineInspection,Linyi,Shandong250100,China;HezeUniversity,Heze,Shandong274000,China;
3、CollegeofFoodScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan,Hubei430070,China)Abstract:Inthispaper,itsummarizedthevariousprinciplesandmethodsofproteinseparationandpurification,andintroducedthemethodsandfactorsofproteincrystallizationatthesametime.Ke
4、ywords：protein;separation;purification;crystallization蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和質(zhì)分子的親水性，當(dāng)水中加入少量鹽時，鹽離子與水分子生物功能的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)在自然界中存在于復(fù)雜的混合對蛋白質(zhì)分子的極性基團的影響，使蛋白質(zhì)在水中溶解體系中，而且許多重要的蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的含量極低。要度增大。但鹽濃度增加一定程度時，水的活度降低，蛋白把蛋白質(zhì)從復(fù)雜的體系中分離出來，同時又要防止其組質(zhì)表面的電荷大量被中和，水化膜被破壞，于是蛋白質(zhì)相成、結(jié)構(gòu)的改變和生物活性
5、的喪失，顯然是有相當(dāng)難度互聚集而沉淀析出。的。目前蛋白質(zhì)的分離純化技術(shù)的發(fā)展趨向于精細(xì)而多1.1.2等電點沉淀法樣化技術(shù)的綜合運用，但基本原理均是以蛋白質(zhì)的性質(zhì)利用蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)為依據(jù)的。破碎組織細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)混合物，利用鹽析又具有不同的等電點來分離蛋白質(zhì)的方法，稱為等電點法、有機溶劑沉淀法等對蛋白質(zhì)進行粗提；電泳和色譜技沉淀法。蛋白質(zhì)的等電點(pI)即蛋白質(zhì)的凈電荷為零時的術(shù)則可對粗提蛋白質(zhì)進行進一步的分離純化，而且可對pH值，由于等電點時的蛋白質(zhì)凈電荷為零，因而失去了純化蛋白質(zhì)進行結(jié)
6、晶和制備。實際工作中應(yīng)按不同的要水化膜和分子間的相斥作用，疏水性氨基酸殘基暴露，蛋求和條件選用不同的方法。白質(zhì)分子相互靠攏、聚集，最后形成沉淀析出。1.1.3有機溶劑沉淀法1蛋白質(zhì)的分離純化有機溶劑沉淀法是指有機溶劑能使蛋白質(zhì)分子間極1.1粗提性基團的靜電引力增加，與水作用能破壞蛋白質(zhì)的水化1.1.1鹽析沉淀法膜，而水化作用降低，促使蛋白質(zhì)聚集沉淀。常用的有機鹽析沉淀法是根據(jù)不同蛋白質(zhì)在一定濃度鹽溶液中溶劑是乙醇和丙酮，由于有機溶劑的加入易引起變性失溶解度降低程度不同達到彼此分離的方法。蛋白質(zhì)易溶活，尤其乙醇和水混
7、合釋放熱量，操作一般宜在低溫下進于水，因為其分子的-COOH、-NH2和-OH都是親水基行，且在加入有機溶劑時注意攪拌均勻以免局部濃度過團，這些基團與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于大。用此法所析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉蛋白質(zhì)分子周圍形成1~100nm大小的親水膠體，從而削降。分離后的蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)立即用水或緩沖液溶解，以降弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。蛋白質(zhì)分子表面親水基低有機溶劑的濃度。團越多，水化層越厚，蛋白質(zhì)分子與溶劑分子之間的親和1.2精提力就越大，因而溶解度也越大。親水膠體在水中的穩(wěn)定因1.2
8、.1層析(chromatography)素有兩個，即電荷和水膜。因為中性鹽的親水性大于蛋白①離子交換柱層析。離子交換柱層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動相的體系進行的。離子交換劑收稿日期：2009-07-11作者簡介：姚知淵(1983-)，男，山東威海人，大學(xué)本科，科員，研究方有陽離子交換劑(如：羧甲基纖維素；CM-纖維素)和陰離向：動植物檢疫。子交換
