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1、生物技術(shù)通報(bào)·研究報(bào)告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2o12年第9期大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表達(dá)田智蕊韓紅武志海李東哲楊美英(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，長(zhǎng)春130118)摘要：以鹽誘導(dǎo)后的大豆根為材料，提取總RNA，RT—PCR得到GmOLPa目的片段。對(duì)其蛋白序列分析表明，該蛋白屬于GH64．TLP—SF同源超家族中的PR一5蛋白，第25—244位氨基酸是其保守結(jié)構(gòu)域，與番茄中的PR．5親緣關(guān)系最為接近。構(gòu)建GmOLPa基因ORF的原核表達(dá)載體pET一28一GP，并對(duì)其在大腸桿菌BL21中的表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。SDS—PAGE證實(shí)重組質(zhì)粒能夠在大腸桿菌BL21中表達(dá)
2、，目的蛋白分子量約為30kD，最佳誘導(dǎo)時(shí)間為4h，最佳IPTG誘導(dǎo)濃度為1．0mmol／L。關(guān)鍵詞：PR一5蛋白GmOLPa蛋白基因克隆蛋白序列分析原核表達(dá)ProteinSequenceAnalysisandProkaryoticExpressionofGmOLPaGenefromSoybeanTianZhiruiHanHongWuZhihaiLiDongzheYangMeiying(JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118)Abstract：InordertoidentifythefunctionofGmOLPagenefromsoyb
3、ean，totalRNAwasextractedfromtherootofsoybeaninducedbysaltstressandGmOLPagenefragmentwasobtainedbyRT—PCR．GmOLPaproteinsequencewasanalyzedandtheresultsshowedthatGmOLPaproteinbelongedtoPR一5ofGH64一TLP—SFhomologoussuperfamilyandwasthemostcloselygeneticrelationshipwiththePR-5fromtomato．The25—244amino
4、acidsintheGmOLPaproteinsequenceweretheconservativedomain．ProkaryoticexpressionvectorpET-28-GPofGmOLPagenewasconstructedandexpressiveconditionsofpET一28一GPinE．coltBL21wereoptimized．SDS—PAGEwasassayedandshowedthatrecombinantplasmidcouldbeinductedandexpressedinEcolt．Thetargetproteinmolecularweightw
5、asapproximately30kD，theoptimalinductiontimeof4handtheoptimalIPTGinductionconcentrationof1．0mmol／L．Keywords：PR一5proteinGmOLPaproteinGenecloningProteinsequenceanalysisProkaryotieexpression病程相關(guān)蛋白(pathogenesis．relatedprotein，PRP／的生理生化功能。大量研究表明，PR．5蛋白不僅能PRs)是指由寄主植物編碼，在病理或病理相關(guān)的誘導(dǎo)真菌類的細(xì)胞程序性死亡(PCD)L5，保護(hù)
6、植環(huán)境下誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì)¨JoPRs最早由Van物免受病害的侵染，還能通過誘導(dǎo)植物細(xì)胞的PCD，Loon和VanKammen于1970年在煙草花葉病毒增強(qiáng)植株整體對(duì)凍害的抵抗j。冬黑麥葉片的質(zhì)外(TMV)誘發(fā)產(chǎn)生過敏性壞死反應(yīng)的煙草葉片中檢測(cè)體內(nèi)分泌的PR．5蛋白在低溫誘導(dǎo)下，與抗凍蛋白有到。之后，病程相關(guān)蛋白的研究報(bào)道日漸增多。已著同樣的抗凍功效?。目前，已經(jīng)從大麥、玉米、發(fā)現(xiàn)的病程相關(guān)蛋白被歸類為17個(gè)家族J。番茄¨。。和小麥?等植物中發(fā)現(xiàn)了PR．5蛋白。PR．5蛋白是PRs蛋白家族中的一類，也被稱為GmOLPa蛋白是大豆在鹽誘導(dǎo)下所產(chǎn)生的一類類甜蛋白(thaumatin．1
7、ikeprotein，TLP)L4J~PR一5蛋蛋白，稱為大豆類滲透蛋白，屬于大豆PR一5家族。白包含了具有多種抗逆功能的滲調(diào)蛋白(osmotin)前人研究表明，該蛋白具有抗鹽功能，為更好的在和類滲調(diào)蛋白(OLP)，可能使它在植物中具有不同蛋白水平上研究GmOLPa的功能。本試驗(yàn)從鹽處理收稿日期：2012—02—29基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31171478)，吉林省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20101573)作者簡(jiǎn)介：田智蕊，女，碩士研究生，研究方向：植物
