資源描述：
《H9亞型禽流感病毒SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR法檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)30(3)：195～199，2013JournalofQingdaoAgriculturalUniversity(NaturalScience)文章編號：1674—148X(2013)03—0195一O5H9亞型禽流感病毒SYBRGreenI熒光定量RT—PCR法檢測方法的建立徐守振，尹燕博(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島266109)摘要：RT—PCR擴增H9亞型禽流感病毒(AIV(H9))的HA基因保守片段，將其克隆到pMD18一T載體，經(jīng)測序驗證正確作為陽性質(zhì)粒。以陽性質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，建立SYBRGree
2、nI熒光定量RT—PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，該方法靈敏性可達74．3copies／~L，且特異性好、重復(fù)性佳。SYBRGreenI實時熒光定量RT—PCR方法為H9亞型禽流感的病原的快速診斷和病毒的定量分析提供重要手段。關(guān)鍵詞：H9亞型禽流感病毒；HA基因；SYBRGreenI熒光定量PCR中圖分類號：$852．65文獻標(biāo)識碼：ADOI：10．3969／J．ISSN．1674—148X．2013．03．009EstablishmentofSYBRGreenIReal-timeRT—PCRDetectingH9AvianInfluenzaVi
3、rusXUShouzhen。YINYanbo(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao266109，China)Abstract：ConservativefragmentofHAgeneofAIV(H9)wasamplifiedbyRT—PCRandclonedintopMD18一Tvector．Aftersequencing，thepositiverecombinantplasmidwasacquiredandusedt
4、oestablishstandardcurveoftheSYBRGreenIreal—timeRT-PCR．Theresultsshowedthatthesensitivitywassogoodthat74．3copies／~Loftheviruscontentcouldbedetected．Furthermore，thismethodwashighlyspe—cificandreproducible．ItisconcludedthattheSYBRGreenIreal—timeRT—PCRisagoodtechnologyforpathog
5、enicdiagnosisandvirusquantificationofAIV(H9)．Keywords：H9N2avianinfluenzavirus；HAgene；SYBRGreenIReal—timeRT—PCR禽流感(avianinfluenza，AI)是由于正黏病毒科養(yǎng)禽生產(chǎn)造成的巨大影響和損失，如何快速準(zhǔn)確地流感病毒屬的A型流感病毒(AIV)引起的一種禽檢測AIV(H9)已成為防控的關(guān)鍵。類或人類感染的傳染病。根據(jù)AIV的血凝素(HA)禽流感AI(H9)與新城疫(ND)、雞傳染性支氣和神經(jīng)氨酸酶(NA)抗原差異，AIV可分為16
6、個管炎(IB)臨床癥狀相似，給AI(H9)的診斷造成了HA亞型(H1～H16)和9個NA亞型(N1～極大困難。傳統(tǒng)的病毒分離和血清學(xué)診斷方法費時N9)口]。H9亞型AIV(AIV(H9))于1966年在美費力，不利于AIV(H9)的快速診斷；而常規(guī)RT—國威斯康星在火雞中首次發(fā)現(xiàn)，自1999年以來也出PCR方法由于實驗室污染等原因存在一定的假陽現(xiàn)AIV(H9)多次感染人的報道。目前，AIV(H9)性，且不能對病毒進行定量分析_3]。近年發(fā)展起來在我國廣泛存在，可引起雛雞死亡，生產(chǎn)性能下降，的實時熒光定量PCR(Real-timePCR)技術(shù)以
7、其快常與其他病原(如大腸桿菌)混合感染，給養(yǎng)禽業(yè)造速簡單、高度靈敏和強特異性等優(yōu)點廣泛應(yīng)用到基成嚴(yán)重經(jīng)濟損失I2]。鑒于AIV(H9)對人類健康和因表達分析，并引用到AIV的定性和定量檢收稿日期：2013—07—09基金項目：青島市公共領(lǐng)域科技支撐計劃(10-3-3—17一nsh)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團隊項目作者簡介：徐守振(1977一)，男，山東沂水人，副教授，博士，主要從事禽病防治研究。青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)測[4]，但Real—timePCR方法用于檢測AIV(H9)10×Buffer3肚L，MgC123L，dN
8、TP(10mmol／L)臨床樣品的研究很少。本試驗旨在建立快速檢測臨2．5FL，rTaq酶0．5FL，上下游引物各0．5FL，反轉(zhuǎn)床病料中AIV(H9)的SYBRG
