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《liss在間接抗人球蛋白試驗(yàn)中的技術(shù)細(xì)節(jié)探討》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、LISS在間接抗人球蛋白試驗(yàn)中的技術(shù)細(xì)節(jié)探討 打L原和抗體反應(yīng)的影響因素較多，低離子強(qiáng)度溶液(LISS)可減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子，增加抗原、抗體間的靜電引力，加快抗體與抗原的結(jié)合速度，因此可以縮短檢出大多數(shù)打L體的孵育時(shí)間。現(xiàn)以IgU抗-D為例，就LISS在間接抗人球蛋自試驗(yàn)(lAT)中的技術(shù)細(xì)節(jié)進(jìn)行相應(yīng)探討，現(xiàn)報(bào)道如下?！ ?材料與方法 1.1材料與儀器上海血液中心國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室的人源抗-D抗體(1gU型批弓20120823)，多特異抗人球蛋自試劑(批弓20120228)}D抗原}H性的篩選譜細(xì)胞(批號(hào)20130316，微柱凝膠卡購(gòu)自瑞士達(dá)亞美公司(批弓50531.72.501/201
2、3.12),濃度為0.03mol/I.低離子強(qiáng)度溶液和新鮮O型D抗原陽(yáng)性的紅細(xì)胞由木科室自備，凝膠卡溫浴和專用離心機(jī)為瑞士達(dá)亞美公司產(chǎn)品，離心機(jī)為日木久保田公司產(chǎn)品。 1.2方法 1.2.1人源抗-D血清最佳稀釋度選擇取試答8支，分別標(biāo)注2}-256共8個(gè)稀釋度，使用新鮮AY型血清做稀釋基質(zhì)，第1支試r加入100pI.人源抗-D,倍比稀釋至第8r注:32倍稀釋r后更換槍頭以避免攜帶影響)，其終容積均為100pL0然后在上述每個(gè)試答中加入D抗原陽(yáng)性的且5篩選細(xì)胞50u1-,I勻置于37C水浴箱溫浴30min后取出，用生l}鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，去上清液，加入1滴多特異抗人球蛋自試劑搖勻，3X
3、00r/min離心15，結(jié)果泉示，本批次人源抗-D血清在1:16稀釋度處最先出現(xiàn)2+凝集，故選1:16稀釋比例作為后續(xù)試驗(yàn)的工作液。 1.2.2L1SS液在間接抗人球蛋自試驗(yàn)中的應(yīng)用取試答12支分成2排分別標(biāo)注2h,1h,30min,10min,5min,0min,最先在2hr中加入100pI.上述標(biāo)化抗-D血清和50pI.2號(hào)篩選D抗原陽(yáng)性的譜細(xì)胞，-答加入2滴LISS液，另一答不加LISS液搖勻后放入37C水浴箱溫浴2h，相隔1h,30min,20min,10min,5min后分別進(jìn)行相同操作，6管在同一時(shí)刻到達(dá)各自的溫浴時(shí)間，均用生理鹽水進(jìn)行3次洗滌，去上清液后加入多特異抗人球蛋自試
4、劑1滴，搖勻后3400r/min離心15s,觀察并記錄各個(gè)溫浴時(shí)間點(diǎn)加LISS液和不加LISS液所對(duì)應(yīng)的凝集強(qiáng)度。 1.2.3LISS液在微柱凝膠卡檢測(cè)中的應(yīng)用將1:16稀釋度的人源IgU抗-D血清重新稀釋為128-4096共6種稀釋度備用，將新鮮O型D抗原陽(yáng)性的紅細(xì)胞獻(xiàn)血員標(biāo)木用生理鹽水進(jìn)行3次洗滌后取壓積紅細(xì)胞分別用生理鹽水和LISS液配制為3%的紅懸液備用。取2張凝膠卡每孔柱卜面分別標(biāo)注128-4096，三卡分別再編1,2弓。在1弓凝膠卡每孔加入20pI.3%鹽水稀釋的紅細(xì)胞懸液，再分別加入90uI.相應(yīng)稀釋度的抗-D血清;在25凝膠卡的每孔分別加入20uL300LISS液稀釋的紅細(xì)
5、胞懸液。所有孔均加入90uI.相應(yīng)稀釋度的抗-D血清。將2張凝膠卡一同孵育15min后離心觀察結(jié)果?！ ?結(jié)果 2.1lAT試驗(yàn)在鹽水介質(zhì)和LISS介質(zhì)在不同孵育時(shí)間點(diǎn)的凝集強(qiáng)度結(jié)果見表1?！ ?.2在鹽水介質(zhì)和LISS介質(zhì)卜微柱凝膠卡凝集強(qiáng)度觀察結(jié)果見表2 3討論 打L原(尤其是紅細(xì)胞類顆粒抗原)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)分2個(gè)步驟，第1步抗原抗體形成復(fù)合物，第2步形成晶格(可見的凝集)。因?yàn)榭乖贵w分子大多是膠體粒子，而在反應(yīng)體系pH大多高于其等電點(diǎn)，故抗原抗體的顆粒均帶負(fù)電荷，與溶液中氧離子等形成雙電層。當(dāng)在第1步抗原抗體復(fù)合物形成時(shí)離子強(qiáng)度越低，可減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，同時(shí)增加抗
6、原、抗體間的靜電引力，其反應(yīng)的平衡常數(shù)K值增大，從而加快了反應(yīng)速度?！ ∽?976年Moorc將LISS應(yīng)用于紅細(xì)胞抗體篩選試驗(yàn)以來(lái)，目前LISS在國(guó)內(nèi)臨床輸血實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃x用的抗體篩選方法有所不同。本文以抗-D抗體(IgU型)為例，使用濃度為0.03mol/I.低離子強(qiáng)度溶液，探討了其在IAT,凝膠微柱法中的一此技術(shù)細(xì)節(jié)?！ ”?結(jié)果泉示，LISS可以明泉加快抗體致敏到細(xì)胞表面的速度,0.03mol/I.LISS液10min致敏效果和鹽水介質(zhì)的60mm致敏效果相當(dāng)，而生理鹽水的離子強(qiáng)度值在0.15mol/L,在1h內(nèi)抗體致敏量隨時(shí)間的推移而增加，但超過(guò)60min后抗體的
7、致敏量并不增加，反而有減少的趨勢(shì)。在經(jīng)典抗人球試驗(yàn)中，每個(gè)試答加入2滴LISS液可以減少孵育時(shí)間，提高抗體檢測(cè)效率，這對(duì)于臨床保證快速、安全的輸血，尤其是急診搶救用血有重要意義。另外通過(guò)孵育時(shí)間梯度試驗(yàn)證實(shí)，在進(jìn)行抗人球蛋自實(shí)驗(yàn)室無(wú)論是鹽水1A'h還是LISS介質(zhì)，1A'h孵育時(shí)間都不要超過(guò)1h,孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)反而會(huì)影響抗體致敏到紅細(xì)胞上，其凝集強(qiáng)度反而降低，具體的機(jī)制仍需進(jìn)一步研究證實(shí)?！ ”?/p>
