碧波tunel細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒(熒光及顯色法)(細(xì)胞樣本專用)1

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1、5碧波TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒（熒光及顯色法）（細(xì)胞樣本專用）CatNumber：BA2650Specification：50次Storeat:-20℃foroneyearMADEBYBIOBOX碧波TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒（熒光及顯色法）（細(xì)胞樣本專用）一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒（熒光及顯色法）(FluorescenceandColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于經(jīng)過固定和洗滌的細(xì)胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應(yīng)把熒光素連接到凋亡細(xì)胞中斷裂的DNA的3’-

2、OH末端，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡檢測(cè)到凋亡細(xì)胞；熒光素亦可被抗熒光素抗體(anti-fluoresceinantibody)標(biāo)記，在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈棕色），因而在普通光學(xué)顯微鏡下即可觀察和計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNAladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上熒

3、光素(FITC)標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡檢測(cè)；同時(shí)熒光素亦可被抗熒光素抗體(anti-fluoresceinantibody)標(biāo)記，在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈棕色），因而在普通光學(xué)顯微鏡下即可觀察和計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被標(biāo)記。這就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。本試劑盒適用于細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）的凋亡原位檢測(cè)。本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)：1、高靈敏

4、度：可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。2、特異性：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。3、快速：僅需約3小時(shí)即可完成。4、操作簡(jiǎn)單：使用Ready-to-Use型試劑，并配有DAB。5、方便觀察：可使用熒光顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，亦可在信號(hào)轉(zhuǎn)換后使用光學(xué)顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。二、試劑盒組份組份Cat:BA2620Cat:BA2650Cat:BA26100儲(chǔ)存條件平衡液1.0mL2.5mL5.0mL-20℃熒光標(biāo)記液20μL50μL100μL-20℃避光TdT酶80μL200μL400μL-20℃ant

5、i-fluoresceinantibody10μL25μL50μL-20℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃避光三、試劑盒以外自備儀器和試劑多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2、TritonX-100、檸檬酸鈉、復(fù)染染液：蘇木素或甲基綠等；蓋玻片、載玻片、染色缸、染色濕盒、熒光顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、37℃孵箱、移液器等。四、保存條件：-20℃保存，熒光標(biāo)記液和DAB需避光保存。五、注意事項(xiàng)：51、TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)

6、生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。2、極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。3、使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀本說明書，提前準(zhǔn)備好相關(guān)試劑。4、因本試劑盒中組分均為微量，使用前請(qǐng)離心。5、為避免試驗(yàn)誤差、降低試劑的損耗，建議使用精密度高的進(jìn)口微量移液槍及槍頭。6、TdT酶反應(yīng)液最好在使用前根椐樣本數(shù)量集中配制，再分別滴加于各樣本片上，避免每個(gè)樣本單獨(dú)配制而產(chǎn)生的試劑損耗。7、DAB為固體粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10mg/ml）后，按說明書

7、顯色使用。8、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。六、操作規(guī)程A、檢測(cè)樣本的預(yù)處理TUNEL檢測(cè)時(shí)樣本的預(yù)處理是試驗(yàn)的關(guān)鍵所在，本說明書推薦的條件僅為普遍情況，用戶需根椐自已的樣本材料及首次試驗(yàn)結(jié)果來調(diào)整各個(gè)條件，如處理時(shí)間、處理濃度等，來優(yōu)化出適合自身樣本的試驗(yàn)條件，從而做出客觀的試驗(yàn)結(jié)果。1、對(duì)于細(xì)胞樣本a、把準(zhǔn)備好的細(xì)胞涂片或爬片自然晾干。b、把晾干的樣本浸入固定液，室溫（15-25℃）固定15-60min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鮮配制）c、把固定