碧波tunel細胞凋亡原位檢測試劑盒(熒光及顯色法)(細胞樣本專用)1

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1、5碧波TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒（熒光及顯色法）（細胞樣本專用）CatNumber：BA2650Specification：50次Storeat:-20℃foroneyearMADEBYBIOBOX碧波TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒（熒光及顯色法）（細胞樣本專用）一、產(chǎn)品簡介TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒（熒光及顯色法）(FluorescenceandColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應(yīng)把熒光素連接到凋亡細胞中斷裂的DNA的3’-OH

2、末端，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡檢測到凋亡細胞；熒光素亦可被抗熒光素抗體(anti-fluoresceinantibody)標記，在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng)（呈棕色），因而在普通光學顯微鏡下即可觀察和計數(shù)凋亡細胞。細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNAladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上熒光素(F

3、ITC)標記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡檢測；同時熒光素亦可被抗熒光素抗體(anti-fluoresceinantibody)標記，在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng)（呈棕色），因而在普通光學顯微鏡下即可觀察和計數(shù)凋亡細胞。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被標記。這就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法檢測細胞凋亡的原理。本試劑盒適用于細胞樣本（細胞涂片）的凋亡原位檢測。本試劑盒有如下優(yōu)點：1、高靈敏度：可以在單

4、細胞水平檢測到細胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。2、特異性：TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。3、快速：僅需約3小時即可完成。4、操作簡單：使用Ready-to-Use型試劑，并配有DAB。5、方便觀察：可使用熒光顯微鏡觀察實驗結(jié)果，亦可在信號轉(zhuǎn)換后使用光學顯微鏡觀察實驗結(jié)果。二、試劑盒組份組份Cat:BA2620Cat:BA2650Cat:BA26100儲存條件平衡液1.0mL2.5mL5.0mL-20℃熒光標記液20μL50μL100μL-20℃避光TdT酶80μL200μL400μL-20℃anti-fluore

5、sceinantibody10μL25μL50μL-20℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃避光三、試劑盒以外自備儀器和試劑多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2、TritonX-100、檸檬酸鈉、復染染液：蘇木素或甲基綠等；蓋玻片、載玻片、染色缸、染色濕盒、熒光顯微鏡、光學顯微鏡、37℃孵箱、移液器等。四、保存條件：-20℃保存，熒光標記液和DAB需避光保存。五、注意事項：51、TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡

6、細胞判斷為凋亡細胞。2、極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標。3、使用前請認真閱讀本說明書，提前準備好相關(guān)試劑。4、因本試劑盒中組分均為微量，使用前請離心。5、為避免試驗誤差、降低試劑的損耗，建議使用精密度高的進口微量移液槍及槍頭。6、TdT酶反應(yīng)液最好在使用前根椐樣本數(shù)量集中配制，再分別滴加于各樣本片上，避免每個樣本單獨配制而產(chǎn)生的試劑損耗。7、DAB為固體粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10mg/ml）后，按說明書顯色使用。8、為了您的安

7、全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。六、操作規(guī)程A、檢測樣本的預處理TUNEL檢測時樣本的預處理是試驗的關(guān)鍵所在，本說明書推薦的條件僅為普遍情況，用戶需根椐自已的樣本材料及首次試驗結(jié)果來調(diào)整各個條件，如處理時間、處理濃度等，來優(yōu)化出適合自身樣本的試驗條件，從而做出客觀的試驗結(jié)果。1、對于細胞樣本a、把準備好的細胞涂片或爬片自然晾干。b、把晾干的樣本浸入固定液，室溫（15-25℃）固定15-60min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鮮配制）c、把固定