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《碧波tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)(細(xì)胞樣本專用)1》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、5碧波TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)（細(xì)胞樣本專用）CatNumber：Specification：Storeat:-20℃foroneyearMADEBYBIOBOX碧波TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)（細(xì)胞樣本專用）一、產(chǎn)品簡介TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(ColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡檢測到凋亡的細(xì)胞。細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組D
2、NA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNAladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞，從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測到凋亡的細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少
3、能夠被標(biāo)記。這就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理。本試劑盒適用于細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）的凋亡原位檢測。本試劑盒有如下優(yōu)點：1、高靈敏度：可以在單細(xì)胞水平檢測到細(xì)胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細(xì)胞凋亡。2、操作簡便：使用Ready-to-Use型試劑，并配有DAB。3、特異性：TUNEL檢測時通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。4、快速：僅需約3個小時即可完成。5、方便觀察：使用光學(xué)顯微鏡觀察實驗結(jié)果，無需貴重設(shè)備。二、試劑盒組份組份Cat:BA2220Cat:BA2250C
4、at:BA22100儲存條件平衡液1.0mL2.5mL5.0mL-20℃TdT酶80μL200μL400μL-20℃Streptavidin-HRP10μL25μL50μL4℃避光Biotin-dUTP20μL50μL100μL-20℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃避光三、試劑盒以外自備儀器和試劑多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2、TritonX-100、檸檬酸鈉、復(fù)染染液：蘇木素或甲基綠等；蓋玻片、載玻片、染色缸、染色濕盒、光學(xué)顯微鏡、37℃孵箱、移液器等。四、保存條件：-20℃保存，Streptavidin-HRP和DAB需避光保存。五、注意事項：1、TUN
5、EL法特異性檢測細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的5非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。2、極少數(shù)細(xì)胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標(biāo)。3、使用前請認(rèn)真閱讀本說明書，提前準(zhǔn)備好相關(guān)試劑。4、因本試劑盒中組分均為微量，使用前請離心。5、為避免試驗誤差、降低試劑的損耗，建議使用精密度高的進(jìn)口微量移液槍及槍頭。6、TdT酶反應(yīng)液最好在
6、使用前根椐樣本數(shù)量集中配制，再分別滴加于各樣本片上，避免每個樣本單獨配制而產(chǎn)生的試劑損耗。7、DAB為固體粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10mg/ml）后，按說明書顯色使用。8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。六、操作規(guī)程A、檢測樣本的預(yù)處理TUNEL檢測時樣本的預(yù)處理是試驗的關(guān)鍵所在，本說明書推薦的條件僅為普遍情況，用戶需根椐自已的樣本材料及首次試驗結(jié)果來調(diào)整各個條件，如處理時間、處理濃度等，來優(yōu)化出適合自身樣本的試驗條件，從而做出客觀的試驗結(jié)果。1、對于細(xì)胞樣本a、把準(zhǔn)備好的細(xì)胞涂片或爬片自然晾干。b、把晾干的樣本浸入固定液，室溫（15-2
7、5℃）固定15-60min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鮮配制）c、把固定好的樣本浸入PBS漂洗3次，每次5min。d、把c步處理好的樣本浸入封閉液中，室溫（15-25℃）封閉10min。（封閉液的配制：3%H2O2溶于無水甲醇）e、把d步處理好的樣本浸入PBS漂洗3次，每次5min。f、把e步處理好的樣本浸入通透液中，冰上（2-8℃）促滲2min。（通透液的配制：0.1%TritonX-100溶于0.1%檸檬酸鈉，需新鮮配制）g、然后轉(zhuǎn)入B步驟標(biāo)記和顯色反應(yīng)。注意事項：a、為防止樣本
