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《基于pcr的cdna基因克隆技術(shù)研究進展》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、基于PCR的cDNA基因克隆技術(shù)研究進展蔡欣1陳宏2,3汪虹英4(1.西北農(nóng)林科技大學生命科學院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學重點實驗室,楊凌712100;2.西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學重點實驗室,楊凌712100;3.徐州師范大學生物技術(shù)研究所,徐州221116;4.甘肅省漳縣一中,甘肅漳縣748300)摘要RT-PCR、single-sided(anchored)PCR、RACE以及stepoutRACE、DDRT-PCR、cDNARDA、SSH等都是建立在PCR基礎(chǔ)之上的cDN
2、A分子克隆技術(shù)，本文介紹各種技術(shù)的優(yōu)缺點、應(yīng)用以及與同類技術(shù)進行比較，這些技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)成功應(yīng)用于大量EST的分離、cDNA文庫的構(gòu)建、編碼產(chǎn)物未知的差別表達基因的分離以及全長cDNA基因序列的克隆等方面。關(guān)鍵詞cDNA基因克隆;PCR;特點；應(yīng)用中圖分類號:Q7locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(Wuzh
3、ensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame5ResearchProgressonPCR-basedTechniquesofcDNAGeneCloningCAIXin1CHENHong2,3WANGHong-ying4(1CollegeofLifeScience,NorthwestSci-techUniversityofAgricultureandForestry,ShaanxiKeyL
4、aboratoryofAgricultureMolecularBiology,Yangling,Shaanxi712100China;2CollegeofAnimalScienceandTechnology,NorthwestSci-techUniversityofAgricultureandForestry,ShaanxiKeyLaboratoryofAgricultureMolecularBiology,Yangling,Shaanxi712100,China;3.InstituteofBiot
5、echnology,XuzhouNormalUniversity,Xuzhou,Jiangsu221116,China;4theFirstMiddleSchoolofZhangxianCounty,Zhangxian,Gansu748300,China)Abstract:RT-PCR,single-sided(anchored)PCR,RACE,stepoutRACE,DDRT-PCR,cDNARDAandSSHareallthetechniquesofcDNAcloningbasedonPCR.T
6、headvantagesanddisadvantagesofeachtechniqueweredicussedandcomparedwiththoseoftheircounterparts.ThesetechniquesarenowsuccessfullyusedinthefieldsofisolationofnumerousESTs,constructionofcDNAlibraries,obtainingofdifferentiallyexpressednewgenesandcloningofc
7、DNAinfulllength.Keywords:cDNAgenecloning;PCR;characteristics;applicationsKaryMullis等在1983年發(fā)明的PCR技術(shù)[1]現(xiàn)在已經(jīng)成為分子生物學及其相關(guān)領(lǐng)域的經(jīng)典實驗方法，目前由PCR技術(shù)衍生出許多重要的相關(guān)技術(shù)，它們在基因克隆、基因測序、基因檢測、基因改造以及突變分析等分子生物學以及其它生命科學研究中具有重要的應(yīng)用價值；目前有許多cDNA基因克隆方法主要是建立于PCR及其衍生技術(shù)之上的，原有技術(shù)被不斷改進、新的技術(shù)被不
8、斷發(fā)明，它們在cDNA文庫的構(gòu)建、EST的分離、cDNA基因克隆、新基因的分離、基因表達的檢測分析等研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。1RT-PCR當我們期望從某一序列已知的mRNA克隆cDNA時，就可以利用RT-PCR(reversetranscriptionPCR)，即逆轉(zhuǎn)錄PCR方法,其原理是由mRNA通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)生的DNA鏈作為模板進行常規(guī)PCR擴增[2]。由于RT-PCR的放大作用和很高的敏感性，所以具有顯著的優(yōu)點：首先，該方法不需要純化mRNA，總RNA就可以
