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《基因克隆技術的研究進展_鐘軍》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、第6卷第4期(專輯)生命科學研究Vol.6No.4(Suppl.)2002年12月LifeScienceResearchDec.2002X基因克隆技術的研究進展鐘軍,李,官春云(湖南農(nóng)業(yè)大學油料作物研究所,中國湖南長沙410128)摘要:為能快速而準確地克隆目的基因,綜述了一些基因克隆常用技術,包括差異表達基因分離技術、轉(zhuǎn)座子標簽技術、圖位克隆技術、同源序列技術、表達序列標簽技術的原理、應用及應用潛力,并對其作了簡要的評價.這些技術有利有弊,應根據(jù)不同的實驗目的和水平來選擇相應的技術.關鍵詞:基因;克隆;差異表達基因
2、分離技術;轉(zhuǎn)座子標簽技術;圖位克隆技術;同源序列技術;表達序列標簽技術中圖分類號:Q78文獻標識碼:A文章編號:1007-7847(2002)S1-0148-05AdvancesinGeneCloningTechniqueZHONGJun,LIXun,GUANChun-yun(TheOilCropInstituteofHunanAgricultureUniversity,Changsha410128,Hunan,China)Abstract:Toclonecandidategenequicklyandcorrectl
3、y,advancesaboutgenecloningincludedmap-basedcloning,transposontagging,homology-basedcandidategenemethod,expressedsequencetaggingmethodsandsomedifferen-tiallyexpressedgeneclonemethodareintroducedandappraised.Becauseoftheadvantagesanddisadvantagesofthosetechniques
4、,varioustechniqueshouldbeselectedaccordingspecialpurposeandlevel.Keywords:gene;clone;differentiallyexpressedgeneclonemethod;transposontagging;map-basedcloning;ho-mology-basedcandidategenemethod;expressedsequencetaggingmethod(LifeScienceResearch,2002,6(Suppl):14
5、8~152)克隆基因的途徑有兩種,正向遺傳學和反向的目標樣提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA探針,遺傳學途徑.前者是依據(jù)目標基因所表現(xiàn)的功能與無特異性表達基因的參照樣的過量mRNA或為基礎,通過鑒定其產(chǎn)物或某種表型突變而進行cDNA雜交,經(jīng)兩輪充分雜交后,移去雜交分子和的;后者則著眼于基因本身,通過特定的序列或在過量的無特異性表達基因的參照樣mRNA或cD-基因組中的位置進行.近幾十年來,許多重點實驗NA,將不形成雜交體的有特異性表達基因的目標室致力于植物基因的克隆,到1992年取得了突破樣cDNA純化富集、擴增,建立
6、相應cDNA文庫即性進展.基因的克隆一般采用下列技術:差異表達為差異表達基因cDNA文庫.此技術最早是由[1]基因分離技術、轉(zhuǎn)座子標簽技術、表達序列標簽技Lamar和Palmer于1984年提出,他們先用超聲術、圖位克隆技術和同源序列技術等.波打斷雌性小鼠的DNA,用Mbo1完全消化雄性小鼠DNA;將兩者一起變性、復性,再將產(chǎn)物克隆1差異表達基因分離技術入表達載體的BamHI位點中,只有那些兩端有1.1扣除雜交技術GATC序列的基因才能被克隆入載體,這樣就達扣除雜交技術的原理是用有特異性表達基因到了扣除兩者共有序列的
7、目的,并得到雄性小鼠X收稿日期:2002-06-11;修回日期:2002-10-14作者簡介:鐘軍(1973-),女,湖南沅江人,博士研究生,從事分子遺傳學研究.Tel:+86-0731-4621882,E-mail:zhhjp@sohu.com第4期鐘軍等:基因克隆技術的研究進展149Y染色體的DNA.該法的缺點是技術要求較高、工在基因的3c端有比較短的一段序列,這部分序列作量大,并且有時得出的數(shù)據(jù)不大可靠.然而經(jīng)過往往是在基因3cUTR區(qū),所提供的信息比較少,為多年的改進,扣除雜交技術已發(fā)展成為眾多克隆得到cDN
8、A必須進行cDNA文庫的篩選.技術的基礎,很多克隆技術都是從此技術衍生發(fā)PCR技術的發(fā)展和應用為差異表達基因分離展而來,如抑制性扣除雜交技術.它是先將樣本技術注入了新的活力.如在差式篩選技術中引入[3]mRNA和參照mRNA分別逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,用4種了PCR,不僅提高了效率,還降低了假陽性.L-i[4]堿基識別并酶切兩種cDNA以產(chǎn)生平端片段
