微生物檢驗(yàn)原始記錄(大腸菌群)

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1、檢驗(yàn)原始記錄編號(hào)：報(bào)告類別：微生物共頁(yè)項(xiàng)目：大腸菌群coliforms檢驗(yàn)地點(diǎn)：樣品名稱：樣品編號(hào)：樣品狀態(tài)：符合檢驗(yàn)要求；其他環(huán)境條件：實(shí)驗(yàn)依據(jù)及步驟GB4789.3-2016樣品稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225ml生理鹽水或磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)容器內(nèi)均質(zhì)，或放入盛有225ml稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中拍擊式均質(zhì)器拍打，制成為1:10樣品勻液。依次進(jìn)行10倍遞增稀釋。液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25ml樣品置盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中混勻，為1:10樣品勻液。樣品勻液的ph應(yīng)在6.5-7.5之間，必要時(shí)分別用1m

2、ol/lNaOH或1mol/lHcL調(diào)節(jié)。取1mL1∶10稀釋勻液沿管壁緩緩注入9ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用一支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100樣品勻液。按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸量管。從樣品勻液制備到樣品接種完畢，全過(guò)程不得超過(guò)15min。初發(fā)酵試驗(yàn)（9管法）每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個(gè)稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯（大腸菌群測(cè)定：如果超過(guò)1ml，則用雙料LST肉湯）36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h

3、，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生。產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48±2h，產(chǎn)期進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)（證實(shí)試驗(yàn)）用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h，，觀察產(chǎn)氣情況。數(shù)據(jù)分析與結(jié)果一、菌落計(jì)數(shù)根據(jù)證實(shí)為大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告大腸菌群的最可能數(shù)。5一、緩沖液1.磷酸鹽緩沖液磷酸二氫鉀34.0g蒸餾水500ml（稀釋液需要1000ml）貯存液：將34.0g磷酸二氫鉀溶于500ml蒸餾水中，用大約175ml的1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7.2，用蒸餾

4、水稀釋至1000ml后貯存冰箱。稀釋液：取貯存液1.25ml用蒸餾水稀釋至1000ml分裝于適宜容器，121℃高壓滅菌15min。2.無(wú)菌生理鹽水氯化鈉8.5g蒸餾水1000ml將稱取好的氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。3.PH調(diào)節(jié)劑1mol/l氫氧化鈉溶液稱取40g氫氧化鈉溶于1000ml無(wú)菌蒸餾水中。1mol/lHcL溶液移取Hcl90ml，用無(wú)菌蒸餾水稀釋至1000ml。二、微生物限量采樣方案（根據(jù)GB4789.1-2016）1.采樣方案分為二級(jí)和三級(jí)方案，二級(jí)采樣方案設(shè)有n、c、m值，三級(jí)采樣方案設(shè)有n、c、m和M值。n：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的

5、樣品件數(shù)c：最大可允許超出m值的樣品數(shù)m：微生物指標(biāo)可接受水平的限量值M：微生物指標(biāo)的最高安全限量值2.例：n=5,c=2,m=1cfu/g,M=10cfu/g,即從一批產(chǎn)品中采集5個(gè)樣品，若5個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果均小于或等于m值（≤1cfu/g），則這種情況是允許的；若≤2個(gè)樣品的結(jié)果（X）位于m值和M值之間（1cfu/g≤X≤10cfu/g），則這種情況也是允許的；若有3個(gè)及以上樣品的檢驗(yàn)結(jié)果位于m和M之間，則這種情況是不允許的；若有任一樣品的檢驗(yàn)結(jié)果大于M（>10cfu/g），則這種情況也是不允許的。檢測(cè)記錄：校對(duì)：檢測(cè)日期：55菌落總數(shù)檢樣原始記錄產(chǎn)品名稱檢測(cè)日期時(shí)間試樣編

6、號(hào)初發(fā)酵試驗(yàn)未產(chǎn)氣培養(yǎng)48±2h復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（接種BGLB管）結(jié)果各試樣菌落分析/個(gè)結(jié)論稀釋液及產(chǎn)氣管數(shù)稀釋液及產(chǎn)氣管數(shù)接種日期時(shí)間結(jié)果日期時(shí)間稀釋液及產(chǎn)氣管數(shù)MPN檢索表　　　　　　　　　(CFU/ml)n=5c=2m=102M=104　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　

7、　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　55