多藥耐藥基因及缺氧誘導(dǎo)因子

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1、多藥耐藥基因及缺氧誘導(dǎo)因子：張廣健高蕊付軍科金鑫張明鑫王健生【摘要】目的分析食管癌多藥耐藥基因(MDR1)及缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)的表達(dá)的相關(guān)性及探討其與臨床病理間的關(guān)系。方法應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR(QRT-PCR)及DR1及HIF-1α表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果34例食管癌組織的MDR1表達(dá)顯著低于癌旁組織(P<0.05)，但高于正常組織(P<0.05)。而HIF-1α在癌組織的表達(dá)水平則顯著高于癌旁組織(P<0.05)。兩基因表達(dá)水平存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。HIF-1α、MDR1表達(dá)均與食管癌的分化程度呈正相關(guān)。結(jié)論MDR1、HIF-1α的

2、表達(dá)在食管癌及癌旁組織中均明顯上調(diào)。HIF-1α可能通過誘導(dǎo)MDR1表達(dá)導(dǎo)致食管癌化療耐藥?！娟P(guān)鍵詞】多藥耐藥基因;缺氧誘導(dǎo)因子;食管癌　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheexpressionsofmultidrugresistancegene(MDR1)andhypoxia-induciblefactor1α(HIF-1α)inhumanesophagealcancerandthecorrelationbetasplesfrom34esophagealcancerpatientsRNAandproteinlevelsofMDR1andHIF-1αea

3、suredbyquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(QRT-PCR)andDR1expressionlevelofcanceroustissuesasite(P<0.05).Houchhigherthanthatintheparatumortissues(P<0.05).Thereasitesimultaneously.ThemodulationofMDR1expressionisprobablydependentupontheexpressionofHIF-1α.　　KEYDR1);hypo

4、xia-induciblefactor1α(HIF-1α);esophagealcancer　　食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，預(yù)后較差。50%～60%的患者就診時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，中位生存期4～8個(gè)月。雖然近年來化療方案的改善可以使中晚期食管癌的化療有效率得到提高，但總的5年生存率仍低于20%[1]?；熌退?multidrugresistance,MDR)是導(dǎo)致食管癌藥物治療失敗的根本原因。因此，研究食管癌MDR機(jī)制是提高其化療效果最關(guān)鍵一步。缺氧是實(shí)體腫瘤生長的微環(huán)境特征之一。腫瘤內(nèi)部總處于相對缺血缺氧的微環(huán)境。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-induciblefacto

5、r1,HIF-1)是缺氧環(huán)境下被激活的重要轉(zhuǎn)錄因子，其受氧調(diào)節(jié)的亞基HIF-1α對化療耐藥基因MDR1表達(dá)的調(diào)控作用受到越來越多的關(guān)注。但是，兩者的相關(guān)性至今未在食管癌組織中得到證實(shí)。本文即在mRNA及蛋白水平研究MDR1與HIF-1α在34例食管癌組織中的表達(dá)變化及相關(guān)性，進(jìn)而探索其在食管癌中的表達(dá)與臨床病理特性之間的關(guān)系。　　1材料與方法　　1.1材料西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2005年9月至2009年6月手術(shù)切除的食管癌組織標(biāo)本34例。其中男23例，女11例，年齡30～70歲。按UICC1997年標(biāo)準(zhǔn)分期，T1～T2期19例，T3～T4期15例;N020例，N114例

6、;Ⅰ期9例，Ⅱ期8例，Ⅲ期17例。采集方法：術(shù)后0.5h內(nèi)采集同一患者食管癌組織及癌旁組織。作為對照的正常組織取自上述標(biāo)本中距腫瘤邊緣5cm以上的食管上皮。新采標(biāo)本由DEPC處理后凍存管分裝、液氮運(yùn)送并立即凍存于-80℃冰箱待用。標(biāo)本性質(zhì)均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)?！　?.2試劑與儀器DEPC購自Amresco公司;Trizol購自Invitrogen公司;RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesiskit試劑盒購自Fermentas公司;SYBRPremixExTaqTMⅡ?yàn)門aKaRa公司產(chǎn)品。PCR引物由AugctBiotechnology公司合成。HI

7、F-1α、P-gp抗體均購自Abcam公司，β-actin抗體為SantaCruz公司產(chǎn)品。辣根酶標(biāo)記羊抗小鼠lgG試劑盒購自北京博奧森公司，BCA蛋白定量試劑盒購自珠海健康元;5810R高速冷凍離心機(jī)為德國Eppendorf公司產(chǎn)品;CE2301微量核酸蛋白定量儀為Genequest公司產(chǎn)品;iQ5Real-TimePCRcycler購自Bio-Rad公司。　　1.3實(shí)驗(yàn)方法①RNA的提取和互補(bǔ)。按照Trizol試劑說明書操作，并測定RNA濃度及A值，A值在1.8～2.0之間，經(jīng)10g/k