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1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個人素質(zhì)的培訓(xùn)計劃luciferase熒光素酶報告檢測試劑盒,promega 雙熒光素酶報告基因分析 轉(zhuǎn)載請注明來自丁香園 發(fā)布日期：XX-04-0810:59文章 關(guān)鍵詞：雙熒光素酶基因表達(dá)報告基因檢測 1.介紹 熒光素酶報告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控常被用來研究培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性。熒光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細(xì)胞中不含內(nèi)源性熒光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的熒光素酶?！ ual-Luciferase?雙熒
2、光素酶報告基因檢測系統(tǒng)中含有在同一細(xì)胞中同時表達(dá)的兩種熒光素酶。通常，報告基因?qū)嶒炛型鶗艿礁鞣N實驗條件的影響，共轉(zhuǎn)染的“對照”報告基因會作為內(nèi)對照，為試驗提供一基準(zhǔn)線。實驗報告基因經(jīng)過內(nèi)參照的處理可以減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對實驗的影響，因此雙報告系統(tǒng)減少了外部干擾，使得實驗數(shù)據(jù)更可信。實驗中報告基因和對照基因的酶沒有種源同源性，螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中沒有任何的交叉干擾。目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個行業(yè)的安全
3、感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個人素質(zhì)的培訓(xùn)計劃 螢火蟲熒光素酶底物和海腎熒光素酶底物分別與檢測試劑反應(yīng)可以使靈敏度最大化。由于超強(qiáng)的光信號和超高的信噪比，本系統(tǒng)被廣泛用于制藥和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中。雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)適配于各種培養(yǎng)哺乳細(xì)胞的培養(yǎng)基，如1640，MEM，DMEM，F(xiàn)12等。這些試劑與被動裂解液所附帶的試劑盒，可以從Promega試劑盒中分開(轉(zhuǎn)載于:寫論文網(wǎng):luciferase熒光素酶報告檢測試劑盒,promega)，單獨使用。 具有
4、超高靈敏度和超寬線性范圍的Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀特別適合DLR報告基因檢測系統(tǒng)，Veritas?軟件中預(yù)裝了DLR的檢測程序使得安裝更為方便，內(nèi)置自動加樣器使得應(yīng)用更為簡單。 Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀使用熒光素酶檢測試劑II(LARII)最低可以檢測到1X10-19mol熒光素酶分子，使用Stop&Glo?試劑可以檢測到1X10-18mol海腎熒光素酶分子，檢測線性范圍分別為8和6個數(shù)量級。所有的檢測均采用純化的重組螢火蟲熒光素酶(E1701)和純化的重組海腎熒光素酶?！ D1－3使用Promega公司D
5、ual-Luciferase?雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)，螢火 蟲熒光素酶(1x10-19到1x10-11mol)和海腎熒光素酶(1x10-14mol)在Modulus?儀上測量結(jié)果?！ ?.所需器材目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項目的正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個人素質(zhì)的培訓(xùn)計劃 ?Veritas?微孔板發(fā)光檢測儀(P/N9100-002) ?96孔白板(E&KS
6、cientificEK-25075) ?Dual-LuciferaseReporter?熒光素酶檢測系統(tǒng)(E1980) ?P200移液器和槍頭 3.實驗方案 試劑制備 熒光素酶檢測緩沖液II和熒光素酶檢測底物：使用所提供產(chǎn)品，－20℃儲存，可以穩(wěn)定保存6個月，熒光素酶檢測底物可以4℃保存1個月。將熒光素酶檢測緩沖液II加入熒光素酶檢測底物中，配制DLR工作液，顛倒混合，直到底物徹底溶解。配好試劑最好當(dāng)天使用，也可以將配好試劑分裝，-20°C儲存1月，-70℃儲存1年?！ top&Glo?底物和Stop&Glo?底
7、物緩沖液：使用所提供產(chǎn)品，－20℃儲存。Stop&Glo?底物溶解緩沖液：使用所提供產(chǎn)品，低于25℃儲存。在玻璃管或者硅化聚丙烯酸樹脂管中將50×Stop&Glo?底物稀釋成1×Stop&Glo?工作液。顛倒混合，工作液最好當(dāng)天使用，也可以將工作液分裝，-20°C儲存2周。 被動裂解緩沖液：用去離子水將5x被動裂解緩沖液稀釋成1x的，低于25°C保存。目的-通過該培訓(xùn)員工可對保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專業(yè)水平，并確保其在這個行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車場安保新項目的
8、正常、順利開展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個人素質(zhì)的培訓(xùn)計劃 注：因為熒光素酶活性受溫度影響，在定量發(fā)光檢測過程中Dual-Luciferase?熒光素酶緩沖液II和Stop&Glo?緩沖液應(yīng)始終保持室溫。混合試劑凍存后再次使用，為確保試劑性能，應(yīng)在低于25℃條件下溶解。溶解后充分混
