干擾素誘導基因IFIT3在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機制研究.pdf

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1、分類號：R617密級：公開學校代碼：11065學號：Y0115130083專業(yè)博士學位論文干擾素誘導基因IFIT3在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機制研究作者姓名關鴿指導教師臧運金教授專業(yè)領域外科學（肝膽血管外）培養(yǎng)單位醫(yī)學部臨床醫(yī)學系答辯日期2018年5月16日干擾素誘導基因IFIT3在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機制研究摘要研究背景及目的：肝臟缺血再灌注損傷(hepaticischemiareperfusioninjury，HIRI)，是部分肝切除術、肝臟移植手術過程中常見的病理生理學現(xiàn)象，對手術的成功率和預后有重要的影響。盡管目前有關肝臟缺血再灌注損傷的相關機制研究取得了長足

2、的進步，但其具體分子機制尚未得到完全闡明。干擾素（interferon，IFN）是一類細胞因子，在機體固有免疫和調節(jié)性免疫過程中有重要作用，主要是通過調節(jié)Janus激酶-信號轉導子和轉錄激活子（JAK-STAT）信號通路并促進干擾素誘導基因（IFN-stimulatedgenes，ISGs）的表達來實現(xiàn)。干擾素誘導基因，是由干擾素誘導的具有三角形四鈦重復段的蛋白（Interferon-inducedproteinswithtetratricopeptiderepeats，IFIT）。干擾素誘導基因IFIT3，又叫維甲酸誘導基因G（Retinoicacid-inducedG，Rig

3、-G），被證明能夠產生抗腫瘤效應，也能夠通過調節(jié)免疫T細胞的增殖從而參與機體的免疫反應和進程。有報道稱肝臟缺血再灌注損傷與I型干擾素信號通路密切相關，而IFIT3能反饋激活I型干擾素信號通路，但還沒有相關報道研究IFIT3在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機制。本研究目的在于：①探討IFIT3在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和分子機制；②尋找肝臟缺血再灌注損傷可能存在的生物標志物和治療靶點。研究方法：①隨機選取40例在青島大學附屬醫(yī)院器官移植中心進行肝移植手術的患者，于生物標本庫中獲取其供肝開放前后的肝組織標本，采集其術后第一次肝功能和血凝常規(guī)結果。檢測供肝開放前后肝組織中IFIT3的表

4、達情況，分析其與患者術后谷丙轉氨酶（alanineaminotransferase，ALT）和谷草轉氨酶（aspartatetransaminase，AST）數(shù)值的相關性。將40例病人分為IFIT3高表達組和低表達組，兩組行肝功能和血凝常規(guī)重要數(shù)據的比較分析。②將C57/B6小鼠分為實驗組和對照組，實驗組開腹后夾閉肝門血管，60min后去除血管夾，恢復肝臟血流，建立肝臟缺血再灌注損傷（HIRI）的小鼠模型。對照組實驗步驟同實驗組，但不夾閉肝門血管。24h后處死小鼠，下腔靜脈取血，并切取肝左葉。小鼠肝臟做病理切片和HE染色并進行病理學評估和壞死區(qū)域的對比。檢測兩組小鼠血清中ALT和

5、AST的水平并進行分析，檢測兩組小鼠肝臟中IFIT3mRNA和蛋白的表達水平并進行分析。將C57/B6小鼠分為三組，第一組（對照組）小鼠只進行開腹和關腹手術；第二組（實驗組，siNC組）小鼠在尾靜脈注射siNC慢病毒（無關基因敲低）的基礎上建立HIRI的小鼠模型；第三組（實驗組，siIFIT3組）小鼠在尾靜脈注射siIFIT3慢病毒（靶I向敲低IFIT3）的基礎上建立HIRI的小鼠模型。獲取小鼠的肝組織及血液標本。檢測三組小鼠肝臟中IFIT3mRNA的表達水平并進行分析；小鼠肝臟進行病理切片和HE染色，三組小鼠進行壞死區(qū)域比較和面積的計算并進行分析；檢測三組小鼠血清中ALT和AS

6、T的水平并進行分析；檢測三組小鼠肝臟組織中，炎癥因子白介素1β(IL-1β)、白介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子α(TNFα)mRNA和蛋白的表達水平并進行分析。③選取小鼠巨噬細胞細胞株RAW246.7細胞，利用礦物油來構建缺糖缺氧/復糖復氧（hypoxiareoxyg，HR）細胞模型。設置三組細胞，第一組（對照組）不進行任何處理；第二組（實驗組，siNC組）在用siNC慢病毒（無關基因敲低）轉染的基礎上建立HR細胞模型；第三組（實驗組，siIFIT3組）在用siIFIT3慢病毒（靶向敲低IFIT3）轉染的基礎上建立HR細胞模型。檢測三組細胞中IFIT3mRNA和蛋白的表達水平并

7、進行分析，分別檢測三組細胞和細胞上清中，炎癥因子IL-1β、IL-6和TNFαmRNA和蛋白的表達水平并進行分析。④照上述實驗方法，再次構建小鼠模型和細胞模型。小鼠模型中，檢測肝臟中干擾素信號通路誘導基因MX1、CXCL10和ISG15mRNA的表達水平并進行分析；細胞模型中，檢測細胞中MX1、CXCL10和ISG15mRNA的表達水平并進行分析。結果：①在選取的40例肝移植患者中，缺血再灌注后肝組織標本中IFIT3的表達水平明顯高于再灌注之前IFIT3的表達水平（P<0.001