農(nóng)桿菌介導(dǎo)floral—dip轉(zhuǎn)基因方法研究進(jìn)展

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1、維普資訊http://www.cqvip.com2006年9月中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)2006，2Z(3)：362—367Chinesejournalofoilcropsciences農(nóng)桿菌介導(dǎo)floral—dip轉(zhuǎn)基因方法研究進(jìn)展韋獻(xiàn)雅，付紹紅，牛應(yīng)澤h(1．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)油菜研究中心，四川雅安625014；2．成都市第二農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，國(guó)家油菜改良四川成都分中心，四川成都611130)摘要：農(nóng)桿菌介導(dǎo)的floral—dip轉(zhuǎn)基因方法是近年發(fā)展起來的一種簡(jiǎn)便、快速、高效、重復(fù)性好、穩(wěn)定性高的非組織培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因方法。介紹了該方法的發(fā)展、轉(zhuǎn)化原理、轉(zhuǎn)化條

2、件、后代遺傳學(xué)分析，并討論了其存在的問題，展望了其在基因工程中的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)；floral—dip；基因轉(zhuǎn)化中圖分類號(hào)：Q943．2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-9084(2006)03—0362—06農(nóng)桿菌介導(dǎo)的floral—dip轉(zhuǎn)化方法是近年發(fā)展大。floral—dip法轉(zhuǎn)化過程中加入SilwetL一77與未起來的一種簡(jiǎn)便、快速、高效、重復(fù)性好、穩(wěn)定性高的加入SilwetL一77的處理相比，轉(zhuǎn)化效率差別很大。非組織培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因方法，主要運(yùn)用于擬南芥T—研究還發(fā)現(xiàn)，用該法轉(zhuǎn)化擬南芥時(shí)，農(nóng)桿菌液體培養(yǎng)DNA或轉(zhuǎn)座子插入突

3、變體庫(kù)的構(gòu)建和功能基因組基中除加入SilwetL一77外，只需再加入蔗糖即可達(dá)研究¨。其最大的優(yōu)點(diǎn)在于能直接獲得轉(zhuǎn)化的種到較好的轉(zhuǎn)化效果。另外，轉(zhuǎn)化操作時(shí)擬南芥的發(fā)子，避開了組織培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)，排除了組織培養(yǎng)中育階段對(duì)轉(zhuǎn)化效率影響也很大，一般以開花前5～因體細(xì)胞變異，給目的基因的正確表達(dá)及分子遺傳10d為宜。學(xué)研究帶來的極為不利的遺傳背景，同時(shí)為一些不在繼Clough應(yīng)用floral—dip法轉(zhuǎn)化擬南芥獲易建立遺傳再生體系的作物類型提供了基因轉(zhuǎn)移的得成功后，近幾年也有不少學(xué)者應(yīng)用floral—dip法新途徑。Floral—dip轉(zhuǎn)化方法現(xiàn)已

4、成功應(yīng)用于擬南轉(zhuǎn)基因，但成功的例子較少。目前僅在擬南芥、蘿芥。、蘿卜【引、莒蓿、油菜等植物中。本文根卜、油菜及莒蓿上有成功的報(bào)道。據(jù)目前所能查閱到的資料，對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的floral—Curtis采用floral—dip法對(duì)蘿卜(Raphanusdip轉(zhuǎn)化方法的機(jī)理和目前的研究進(jìn)展作簡(jiǎn)要概述。sat~usL．var．1ongiplnnatusBailey)轉(zhuǎn)化獲得了成功。他們?cè)诒容^了植物發(fā)育的不同時(shí)期對(duì)轉(zhuǎn)化效率l農(nóng)桿菌介導(dǎo)的floral—dip轉(zhuǎn)基因方的影響后發(fā)現(xiàn)，主花序的轉(zhuǎn)化效率最高；在Pluron．法的提出及發(fā)展icF一68、Tween2

5、0及SilwetL一77等3種表面活性Clough[4把真空滲透轉(zhuǎn)化法(vacuuminfiltra—物質(zhì)中，SilwetL一77的效果最好。徐光碩等用intion，Bechtold)演變成為更簡(jiǎn)便的農(nóng)桿菌介導(dǎo)no——planta法處理5個(gè)甘藍(lán)型油菜品種，獲得了抗卡ral—dip轉(zhuǎn)基因方法，該法只需將農(nóng)桿菌菌液與植那霉素經(jīng)PCR檢測(cè)的陽性植株，平均轉(zhuǎn)化效率為株的花接觸而不需要進(jìn)行真空處理。所不同的是，0．1％左右，且各甘藍(lán)型油菜品種問的轉(zhuǎn)化率無明顯在菌液中加入一種表面活性劑物質(zhì)SilwetL一77差異。付紹紅等用floral—dip法處理甘

6、藍(lán)型油(OSiSpecialties，Incl，Danbury，CT，USA)，并首次應(yīng)菜，主要是研究表面活性劑SilwetL一77對(duì)floral—用該法轉(zhuǎn)化擬南芥獲得成功。同時(shí)Clough對(duì)影響dip轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜效果的影響，獲得了103株抗卡floral—dip轉(zhuǎn)化的三個(gè)主要因素(植株生長(zhǎng)狀態(tài)、蔗那霉素(Km)的抗性植株，認(rèn)為0．05％的表面活性糖和表面活性劑)做了比較系統(tǒng)的研究。他們把真劑SilwetL一77對(duì)floral—dip轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜最為空滲透法與floral—dip法作了對(duì)比，發(fā)現(xiàn)在菌液中有利。加入SilwetL一77后，

7、抽真空對(duì)：于轉(zhuǎn)化效率影響不目前擬南芥功能基因組的研究多以該法獲得突收稿日期：2005—10—．25基金項(xiàng)目：四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(04JY029)作者簡(jiǎn)介：韋獻(xiàn)雅(1980一)，女，廣西南寧人，I~lJJl農(nóng)業(yè)大學(xué)在讀碩士研究生，從事油菜轉(zhuǎn)基因研究?！ねㄓ嵶髡撸簄yz@8{．Oalt1．edu．cno維普資訊http://www.cqvip.com韋獻(xiàn)雅等：農(nóng)桿菌介導(dǎo)floral—dip轉(zhuǎn)基因方法研究進(jìn)展363變體：Lawrence?在用反義RNA(RNAi)研究多倍體生～條T—DNA單鏈(T一鏈)，T一鏈5’末端與一作物中冗余基因

8、對(duì)基因組的作用時(shí)為獲得突變體實(shí)分子VirD2結(jié)合，其余部分與VirE2結(jié)合，組成T一驗(yàn)材料，用floral—dip法轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥也獲復(fù)合體。T一復(fù)合體被轉(zhuǎn)移到農(nóng)桿菌外，通過