資源描述：
《農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜活體植株轉(zhuǎn)基因方法研究-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、分子植物育種，2014年，第12卷，第4期，第796—801頁MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．4，796—801技術(shù)主題TechnologyFeature農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜活體植株轉(zhuǎn)基因方法研究魏愛民杜勝利韓毅科劉楠天津科潤黃瓜研究所，天津，300192通訊作者，dshengli@aliyun．com摘要為建立簡單高效的黃瓜轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系，本研究以攜帶有抗除草劑Bar基因的農(nóng)桿菌工程菌浸泡處理開花期黃瓜嫩梢，進(jìn)行活體植株轉(zhuǎn)基因方法研究。研究結(jié)果表明最佳轉(zhuǎn)化體系為：表面活性劑silwet一77適宜濃度0．01％～0．05％；菌液浸泡最佳位
2、置為頂部以下10cm嫩梢，最適子房發(fā)育時(shí)期為開花前5-12d子房；農(nóng)桿菌菌株EHA105浸染效果優(yōu)于LBA4404；3次重復(fù)浸泡處理有利于提高轉(zhuǎn)化頻率。黃瓜苗期除草劑抗性篩選適宜濃度為17％草胺膦1100倍稀釋液。研究獲得除草劑抗性植株1320株，PCR陽性植株36株，其中30株經(jīng)Southern斑點(diǎn)雜交后有陽性信號(hào)，最高轉(zhuǎn)化效率為9．5％。關(guān)鍵詞黃瓜，轉(zhuǎn)基因，活體植株，抗除草劑StudyonTransformationTechnologyThroughAgrobacteriumtumefaciensMediationinLivingCucumberPlantsWeiAimin
3、DuShengliHanYikeLiuNanTianjinKernelCucumberResearchInstitute，Tianjin，300192Correspondingauthor，dshengli@aliyun．comDOI：10．13271~．mpb．012．000796AbstractToestablishasimpleandeficientcucumbertransforillationmethod，anewtransformationmethodthroughsoakingcucumbershootsintosolutionofAgrobacteriumtum
4、eq％iensstrainwithBargenewasstudied．Theresultsindicatedthattheoptimalsurfactantsilwet一77concentrationwas0．01％~0．05％．theoptimalsoakingpositionwastop10cmlongshoots，theoptimalovarystagefortransformationwas5-12dbeforeanthesis．AgrobacteriumstrainEHA105wasbetterthanLBA4404intransformationeficiency，
5、3timesofrepeatsoakingtreatmentwasbeneficialfortransformation．Theoptimalglyphosateconcentrationforherbicideresistantplantsscreeningwas1100timesdilutionofthe17％origina1．Among1320herbicideresistantplants，36werePCRpositive．withinwhich30plantswereSouthernblottingpositive．Thehighesttransformatione
6、ficiencywas9．5％．KeywordsCucumber(CucumisSativusL．)，Transformation，Livingplants，Herbicideresistant黃瓜CucumisSativusL．)是中國重要的蔬菜作植株，由于步驟繁瑣，基因型差異明顯，轉(zhuǎn)化率較低，物之一，目前其品種選育仍以常規(guī)育種為主，由于現(xiàn)且組培轉(zhuǎn)化過程易產(chǎn)生體細(xì)胞變異，常使轉(zhuǎn)基因植有種質(zhì)資源缺乏抗病、抗蟲、抗逆等優(yōu)異材料，阻礙株在育種中無法應(yīng)用。此外，研究人員通過開展電擊了重大突破性新品種選育。通過基因工程方法導(dǎo)入法(徐華強(qiáng)等，1991)、基因槍法(Kodamaeta1．，
7、1993)、優(yōu)異外源基因，創(chuàng)造黃瓜育種新種質(zhì)，將成為提升我花粉管通道法(李遠(yuǎn)新等，2000)等黃瓜轉(zhuǎn)基因研究，國黃瓜品種選育水平的重要手段?？杀荛_組織培養(yǎng)過程，操作較簡單，可直接獲得轉(zhuǎn)化黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化方法較多采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸種子，但其轉(zhuǎn)化率相對較低，轉(zhuǎn)基因植株后代遺傳情染子葉或子葉節(jié)，通過離體體細(xì)胞再生，獲得轉(zhuǎn)基因況較為復(fù)雜。收稿日期：2014—01—28接受日期：2014-03-15網(wǎng)絡(luò)出版日期：2014—03—26URL-http：／／www．biopublisher．cn／index
