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《兔抗hnrnp b1多克隆抗體的制備、純化及驗(yàn)證 畢業(yè)論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題 目兔抗hnRNPB1多克隆抗體的制備純化及驗(yàn)證姓 名學(xué)號(hào)2010413102院 系生命科學(xué)學(xué)院?！ I(yè)生物工程指導(dǎo)教師職稱副教授2014年5月17日曲阜師范大學(xué)教務(wù)處制目錄摘要1關(guān)鍵詞1Abstract1Keywords11.引言11.1hnRNP的結(jié)構(gòu)與功能11.2hnNPs與腫瘤疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究進(jìn)展21.3關(guān)于hnRNPB121.4多克隆抗體31.5間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法31.6抗體的分離純化方法32材料與方法42.1材料與儀器42.2主要試劑42.3兔抗人hnRNP多克隆抗體的制備52.3.1抗原準(zhǔn)備52.
2、3.2取空白血清52.3.3動(dòng)物免疫52.3.4多抗血清效價(jià)的檢測(cè)52.3.5間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法52.4兔抗人hnRNP多克隆抗體的純化52.5westernbloting對(duì)兔抗hnRNPB1多抗的驗(yàn)證62.6免疫沉淀對(duì)兔抗hnRNPB1多抗的驗(yàn)證72.7免疫組化對(duì)兔抗hnRNPB1多抗的驗(yàn)證73.結(jié)果與分析83.1兔抗hnRNPB1多抗的效價(jià)及純化產(chǎn)量83.2兔抗hnRNPB1的western驗(yàn)證83.3兔抗hnRNPB1的免疫沉淀驗(yàn)證93.4兔抗hnRNPB1多克隆抗體的免疫組織化學(xué)表達(dá)94討論與展望10參考文獻(xiàn)10致謝11兔抗hnR
3、NPB1多克隆抗體的制備、純化及驗(yàn)證摘要：目的：自主制備抗hnRNPB1多克隆抗體，將其純化并驗(yàn)證多抗的特異性。方法：以自行設(shè)計(jì)的偶聯(lián)多肽hnRNPB1為抗原免疫新西蘭成年兔制備兔抗hnRNPB1多克隆抗體，用間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA的方法測(cè)定效價(jià)后進(jìn)行親和層析，將純化后的多抗用western、免疫組化、免疫沉淀的驗(yàn)證方法進(jìn)行鑒定并驗(yàn)證其特異性。結(jié)果：經(jīng)偶聯(lián)多肽免疫動(dòng)物后，ELISA檢測(cè)抗血清效價(jià)為1:10000，用親和層析法進(jìn)行純化得到A兔34mg、B兔41mg的抗體，western以及免疫沉淀分析在37KD有清晰條帶，為hnRNPB1蛋白。免疫組化
4、分析在光學(xué)顯微鏡下觀察到hnRNPB1陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色，顆粒狀。結(jié)論：成功制備兔抗hnRNPB1多克隆抗體經(jīng)ELISA效價(jià)測(cè)定具有較高純度；經(jīng)western、免疫沉淀、免疫組化驗(yàn)證具有較好的特異性，可以滿足實(shí)驗(yàn)要求，為進(jìn)一步研究hnRNPA2/B1相互作用蛋白的種類鑒定以及相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建提供基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：多克隆抗體、不均一性核糖核蛋白B1、ELISA、免疫親和層析、westernblottingThepreparation、purificationandverificationofrabbitantihnRNPB1polyclonala
5、ntibody.StudentmajoringinBioengineeringLiuYuTutorLiuJinfengAbstract:Objective:Toprepareanti-hnRNPB1polyclonalantibodyandpurifyit,thenverifyitsspecifictionwithvariousofmethods.Methods:WeusedesignedcouplingpolypeptidehnRNPB1asantigenimmuningadultNewZealandrabbit,whichisawayofpre
6、parationofrabbitantihnRNPB1polyclonalantibody.AfterdeternminingthepotencyofpolyclonalantibodywiththeindirectnoncompetitiveELISAmethod,useaffinitychromatographymethodtomakeapurification.Thenwemakeavalidationwhichusemethodsofwesternblotting、Immunohistochemistryandimmuneprecipita
7、tiontoidentifyandverifyitsspecificity.Results:Aftercouplingpolypeptideimmuneanimals,antiserumtiterofELISAdetectionis1:10000.RabbitA34mgandB41mgofrabbitantibodyispurifiedbyaffinitychromatography.ForhnRNPB1protein,westernandtheanalysisoftheimmuneprecipitationhasclearbandsin37kd.
8、Observationofimmunohistochemicalanalysisunderopticalmicroscop
