基因工程、克隆技術(shù)

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1、第一講基因工程、細(xì)胞工程專題現(xiàn)代生物科技題組1基因工程1．(2010·全國Ⅱ，5)下列敘述符合基因工程概念的是()A．B淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C．用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上解析：基因工程是在生物體外，通過對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出

2、人類所需要的基因產(chǎn)物。所以B為基因工程，而A為動(dòng)物細(xì)胞工程，C為誘變育種，D無人為因素不屬于基因工程。答案：B2．(2010·浙江理綜，2)在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯(cuò)誤的是()A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B．用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C．將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D．用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞解析：限制性核酸內(nèi)切酶用于提取目的基因和切割載體，煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，不能用限制性核酸內(nèi)切酶切割，A項(xiàng)錯(cuò)誤；DNA連接酶可以連接具有相同黏性末端的目的基因和載體，B項(xiàng)正確；

3、受體細(xì)胞可以是受精卵和體細(xì)胞，也可以是去除細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，C項(xiàng)正確；目的基因?yàn)榭钩輨┗?，所以未成功?dǎo)入目的基因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力，篩選時(shí)應(yīng)該用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，D項(xiàng)正確。答案：A題組2細(xì)胞工程1．(2010·廣東理綜，24)新技術(shù)的建立和應(yīng)用對(duì)生物學(xué)發(fā)展至關(guān)重要。下列技術(shù)(或儀器)與應(yīng)用匹配正確的是(雙選)()A．PCR技術(shù)——擴(kuò)增蛋白質(zhì)B．雜交瘤技術(shù)——制備單克隆抗體C．光學(xué)顯微鏡——觀察葉綠體的基粒D．花粉離體培養(yǎng)——培育單倍體植物解析：本題主要考查技術(shù)(或儀器)與應(yīng)用的匹配情況。A項(xiàng)，PCR技術(shù)的應(yīng)用是擴(kuò)增基因，而不是蛋

4、白質(zhì)；B項(xiàng)，雜交瘤技術(shù)的應(yīng)用是制備單克隆抗體，雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體；C項(xiàng)，葉綠體屬于顯微結(jié)構(gòu)，可用光學(xué)顯微鏡觀察，葉綠體中的基粒屬于亞顯微結(jié)構(gòu)，則需電子顯微鏡才能觀察；D項(xiàng)，培育單倍體植物主要包括花粉離體培養(yǎng)和用秋水仙素處理兩大步驟。答案：BD2．(2010·浙江理綜，4)下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞B．克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過程中多數(shù)細(xì)胞的基因型會(huì)發(fā)生改變C．二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無限的D．惡性細(xì)胞系的細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)3．(2010·江蘇生物，24)明黨參是我國珍稀

5、藥用植物，對(duì)其進(jìn)行保護(hù)性開發(fā)利用的方法有(多選)()A．設(shè)計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器，實(shí)現(xiàn)藥用成分的工廠化生產(chǎn)B．大量培養(yǎng)愈傷組織，直接提取藥用成分C．大規(guī)模栽培組織培養(yǎng)苗，獲取藥用成分D．利用組織培養(yǎng)獲得胚狀體，制成人工種子考點(diǎn)1基因工程相關(guān)知識(shí)考查1．基因工程的基本工具的比較作用特點(diǎn)(條件)(1)識(shí)別特定的核苷酸序列(2)在特定位點(diǎn)上切割(1)E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端(2)T4DNA連接酶能連接黏性末端和平末端(1)能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復(fù)制(2)有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)(3)具有特殊的標(biāo)記基因常用類型EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶E·col

6、iDNA連接酶T4DNA連接酶質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒限制酶DNA連接酶載體作用切割目的基因和載體拼接DNA片段，形成重組DNA攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞作用部位兩核苷酸的脫氧核糖與磷酸間形成的磷酸二酯鍵2.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中的方法的比較生物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Ca2＋處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA→表達(dá)目的基因表達(dá)載體提純提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2＋處理細(xì)胞→

7、感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子3.目的基因的檢測(cè)內(nèi)容和方法的比較類型步驟檢測(cè)內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平檢測(cè)第一步目的基因是否插入受體細(xì)胞染色體的DNA上DNA分子雜交技術(shù)(DNA和DNA之間)是否成功顯示出雜交帶第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA核酸分子雜交技術(shù)(DNA和mRNA之間)同上第三步目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子雜交(抗原—抗體之間)同上個(gè)體水平鑒定包括抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品進(jìn)行活性比較，以確定功能是否相同等4.基因工程的應(yīng)用表現(xiàn)方面具體內(nèi)容植物基因工程①

8、抗蟲轉(zhuǎn)基因植物②抗病轉(zhuǎn)基因植物③抗逆轉(zhuǎn)基因植物④利用轉(zhuǎn)基因改良植物品質(zhì)動(dòng)物基因工