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《重組人VEGF165蛋白在畢赤酵母中高效表達與多克隆抗體的》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、重組人VEGF165蛋白在畢赤酵母中高效表達與多克隆抗體的制備王曉1二黃曉平r周宇「刁勇1②(1：華僑大學分子藥物研究院，福建泉州362021；2：華僑大學生物醫(yī)學學院，福建泉州362021)摘要：VEGF在大多數(shù)腫卿卩表達上調，是腫瘤新生血管生成最重要的細胞因子，臨床上VEGF的抗體可以抑制腫瘤的發(fā)展。為深入研究VEGF165的生物活性及VEGF165抗體在腫瘤治療屮的作用，本文構建pPIC9K-VEGF165分泌型載體，線性化后電擊轉化至G5/75(his4)中，經(jīng)MD平板篩選出陽性表達菌株并進行PCR驗證。
2、菌株發(fā)酵上清液經(jīng)SephadexG?25,HeparinSepharoseFF和SephacrylS-100層析介質分離純化，目的蚩白純度達到95%,分子量約為24KD。重組人VEGF165蚩白能夠誘導HUVEC細胞增殖、提高HUVEC細胞的活性。重組人VEGF165蛋白免疫小鼠，制備多克降抗體，間接ELISA法檢測抗體效價達1：51200。重組人VEGF165蛋白的表達及多克隆抗體的成功制備為進一步探索VEGF165在腫瘤形成屮的作用以及VEGF165抗體治療腫瘤的作用奠定了肚礎。關鍵字：重組人VEGF165蚩
3、白；多克隆抗體；畢赤酵母；中圖分類號：文獻標志碼：AHighlevelexpressionofrecombinanthumanVascularEndothelialGrowthFactor165proteininPichiapastorisandPreparationofVEGF165PolyclonalAntibodyWangXiao1,2,HuangXiao-ping1,2,ZhouYu1,2?DiaoYong1,2*(1instituteofMolecularMedicineHuaqiaoUniversit
4、y,Quanzhou362021:2:SchoolofBiomedicalSciencesHuaqiaoUniversity,Quanzhou362021)Abstract:Asthesinglemostpotentangiogenesisfactor,VascularEndothelialGrowthFactor(VEGF)weredetectedup-regulatedexpressioninmosttumors,andantibodiesofwhichwereshowntosuppresstumordeve
5、lopmentclinically.InordertostudythebiologicalactivityofVEGF165andtheeffectofVEGF165antibody收稿日期：通信作者：刁勇(1967年)，男，教授，主要從事新藥研發(fā)、基因藥物研%.E-mail:diaoyong@hqu.edu.cn基金項目：國家自然基金(No.81271691),國際科技合作項H(No.2011DFG33320),福建省科技重大項目(No.2013N5007),華僑大學校級基金(No.11HZR19)資助。tra
6、nsformedintoPichiapastorisstrainGSI15(his4)byelectroporation.ThepositivetransformantswereseperatedbyMDplatescreeningandconfirmedbyPCRreaction.Subsequently,therhVEGF165proteinwasobtainedbypurificationfromthesupernatantwithSephadexG-25、HeparinSepharoseFFandSeph
7、aciylS-100gelfiltrationchromatographwithmolecularweightof24kDandpurityof95%,showingbySDS-PAGE.Furthennore,therecombinantproteinwasfoundtohavehighpotencyofinducingHUVECcellproliferationandimprovingHUVECcellactivity?ThepolyclonalantibodygeneratedfromrhVEGF165im
8、munizedmouseexertsthetiterof1:51200byindirectELISAanalysis.ThesuccessfulexpressionoftherecombinanthumanVEGF165proteinandpreparationofVEGF165polyclonalantibodylaythefoundationforfurtherexp
