蠅蛆殼聚糖急性毒性實(shí)驗(yàn)

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1、蠅蛆殼聚糖急性毒性實(shí)驗(yàn)覃容貴吳建偉國果付萍【摘要】目的觀察蠅蛆殼聚糖的急性毒性反應(yīng)。方法蠅蛆殼聚糖以最大濃度及最大給藥體積的藥液灌胃連續(xù)給藥3次。連續(xù)觀察14d，記錄小鼠毒副反應(yīng)情況。蠅蛆殼聚糖腹腔注射給藥1次，連續(xù)觀察14d，記錄小鼠毒副反應(yīng)情況。結(jié)果觀察14d,灌胃給藥全部動物健存，小鼠體重與空白對照組差異無顯著性，未見任何毒性反應(yīng)。計(jì)算蠅蛆殼聚糖最大給藥量為2700mg/kg體重，相當(dāng)于成人日用量的67.5倍。腹腔注射給藥亦未見任何毒性反應(yīng)。結(jié)論蠅蛆殼聚糖毒性較小?！娟P(guān)鍵詞】蠅蛆殼聚糖小鼠

2、急性毒性甲殼素是地球上除纖維素之外最豐富的天然高分子聚合物。殼聚糖是甲殼素的脫乙?；a(chǎn)物，是一種具有重要開發(fā)價值的天然多糖物質(zhì)。殼聚糖以其獨(dú)有的特性日益成為全世界研究的熱點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)、生物工程、化工、食品、化妝品、農(nóng)業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域得到廣泛深入的研究〔1〕。昆蟲甲殼素也是甲殼素的重要來源之一。研究表明，干蛆中甲殼素的含量高于蝦蟹中甲殼素的含量，因此更具有可利用價值〔2〕。本實(shí)驗(yàn)通過觀察對實(shí)驗(yàn)動物一次給藥后所產(chǎn)生的毒性癥狀及其程度，出現(xiàn)和消失的時間，死亡的發(fā)生率并計(jì)算出其最大給藥量，從而推測蠅蛆殼聚糖

3、對人的急性毒性的強(qiáng)弱?！　?材料與儀器　　1.1藥物蠅蛆殼聚糖，自制。　　1.2動物昆明種小鼠,清潔級,體重18～22g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。　　1.3器材電子秤、量筒、1ml注射器、灌胃針。　　1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，各組數(shù)據(jù)均以±s表示，各項(xiàng)指標(biāo)組間差異的顯著性比較采用IndependentSamplesTTest?！　?方法　　2.1灌胃的最大耐受量實(shí)驗(yàn)　　2.1.1動物分組取小鼠40只,體重18～22g，按體重隨機(jī)分成兩組，即蠅蛆殼聚糖給藥組和蒸餾水對照組

4、，每組20只，雌雄各半。以每籠5只飼養(yǎng)?！　?.1.2藥物配制蠅蛆殼聚糖臨用前用蒸餾水稀釋至所需濃度，以其能保持較好的流動性及可操作性，配制最大濃度為:33mg/ml。　　2.1.3給藥途徑和容積按每10g體重0.3ml藥液，分別于上午8時、10時和12時灌胃給藥，共連續(xù)給藥3次。累計(jì)給藥劑量為2700mg/kg。給藥前禁食12h，正常飲水。給藥量計(jì)算方法如下。　　單次灌胃容積(ml)=〔動物體重(g)×0.4〕/10　　單次灌入的藥量(g)=單次灌胃容積(ml)×0.03　　相當(dāng)于人用量的倍數(shù)

5、=(灌入的總藥量×50×1000)/(動物體重×22)　　小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受藥量小鼠平均體重(20g)×成人平均體重(50000g)成人每日用量　　2.1.4觀察毒性反應(yīng)給藥前后應(yīng)觀察體重、進(jìn)食、進(jìn)水的情況，密切觀察異常毒性癥狀，觀察癥狀包括：①行為活動：不安定、多動、發(fā)聲；②神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：舉尾、震顫、痙攣、運(yùn)動失調(diào)、姿態(tài)異常；③自主神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：眼球突出、流涎、流淚、排尿、下瀉、豎毛、皮膚變色、呼吸；④死亡。每日記錄體重、毒性反應(yīng)和死亡情況，在給藥第1天每隔30min到1h觀察1

6、次,以后每天觀察并稱體重1次，連續(xù)觀察14d，記錄動物毒性反應(yīng)及死亡分布情況。以體重變化、反應(yīng)情況綜合評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以不產(chǎn)生死亡的最大劑量為最大耐受量，推算出相當(dāng)于臨床用藥量的倍數(shù)?！　?.2腹腔注射的急性毒性實(shí)驗(yàn)取20只小鼠,體重18～22g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，不禁水，用配制濃度為30mg/ml的殼聚糖藥液進(jìn)行腹腔注射，每只小鼠注射量為0.3ml(相當(dāng)于900mg/kg)。給藥后即刻觀察動物的反應(yīng)情況，包括動物外觀、行為活動、精神狀態(tài)、食欲、大小便及其顏色、皮毛、鼻、眼、口有無異常分

7、泌物以及死亡情況。在給藥第1天每隔30min到1h觀察1次，以后每天觀察，連續(xù)觀察14d，記錄動物毒性反應(yīng)及死亡分布情況。　　3結(jié)果　　3.1灌胃的最大耐受量實(shí)驗(yàn)　　3.1.1存活情況20只小鼠殼聚糖藥液按900mg/kg劑量灌胃后，無一死亡，繼續(xù)觀察14d，全部存活。　　3.1.2體重變化藥后14d內(nèi)小鼠活動、進(jìn)食，排泄均正常，生長良好，毛色光亮，體重增加，無死亡。其平均體重均隨實(shí)驗(yàn)時間的延長而增加，與相應(yīng)時間的空白對照組相比，差異無顯著性意義(P>0.05)。見表1和圖1?！　”?小鼠

8、經(jīng)口服蠅蛆殼聚糖最大給藥量后體重變化情況（略）　　與空白對照組比較，▲P>0.05；n=10　　3.1.3對臟器的影響觀察期結(jié)束處死動物，尸體肉眼觀察,殼聚糖給藥組和對照組小鼠心、肝、脾、肺、腎等臟器外形、大小正常，切面均未見異常變化。　　3.1.4最大耐受量測定20只小鼠各經(jīng)殼聚糖藥液3次灌胃總量為54mg,相當(dāng)于臨床成年人給藥口服劑量的67.5倍。成年人的擬口服用量為2g/d。按公式計(jì)算:　　小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受藥量小鼠平均體重(20g)×成人平均體重(50000g)成人每