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《重組人vegf165蛋白在畢赤酵母中高效表達和多克隆抗體》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、重組人VEGF165蛋白在畢赤酵母中高效表達與多克隆抗體的制備王曉1,2，黃曉平1,2，周宇1,2，刁勇收稿日期：通信作者：刁勇（1967年），男，教授，主要從事新藥研發(fā)、基因藥物研究.E-mail:diaoyong@hqu.edu.cn基金項目：國家自然基金(No.81271691)，國際科技合作項目(No.2011DFG33320)，福建省科技重大項目(No.2013N5007)，華僑大學(xué)校級基金(No.11HZR19)資助。,2*（1：華僑大學(xué)分子藥物研究院，福建泉州362021；2：華僑大學(xué)生物醫(yī)學(xué)學(xué)院，福建泉州36202
2、1）摘要：VEGF在大多數(shù)腫瘤中表達上調(diào),是腫瘤新生血管生成最重要的細胞因子，臨床上VEGF的抗體可以抑制腫瘤的發(fā)展。為深入研究VEGF165的生物活性及VEGF165抗體在腫瘤治療中的作用，本文構(gòu)建pPIC9K-VEGF165分泌型載體，線性化后電擊轉(zhuǎn)化至GS115(his4)中，經(jīng)MD平板篩選出陽性表達菌株并進行PCR驗證。菌株發(fā)酵上清液經(jīng)SephadexG-25，HeparinSepharoseFF和SephacrylS-100層析介質(zhì)分離純化，目的蛋白純度達到95%，分子量約為24KD。重組人VEGF165蛋白能夠誘導(dǎo)HU
3、VEC細胞增殖、提高HUVEC細胞的活性。重組人VEGF165蛋白免疫小鼠，制備多克隆抗體，間接ELISA法檢測抗體效價達1：51200。重組人VEGF165蛋白的表達及多克隆抗體的成功制備為進一步探索VEGF165在腫瘤形成中的作用以及VEGF165抗體治療腫瘤的作用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵字：重組人VEGF165蛋白；多克隆抗體；畢赤酵母；中圖分類號：文獻標(biāo)志碼：AHighlevelexpressionofrecombinanthumanVascularEndothelialGrowthFactor165proteininPichia
4、pastorisandPreparationofVEGF165PolyclonalAntibodyWangXiao1,2，HuangXiao-ping1,2，ZhouYu1,2,DiaoYong1,2*（1:InstituteofMolecularMedicine，HuaqiaoUniversity，Quanzhou362021；2:SchoolofBiomedicalSciencesHuaqiaoUniversity，Quanzhou362021）Abstract:Asthesinglemostpotentangiogenesi
5、sfactor,VascularEndothelialGrowthFactor(VEGF)weredetectedup-regulatedexpressioninmosttumors,andantibodiesofwhichwereshowntosuppresstumordevelopmentclinically.InordertostudythebiologicalactivityofVEGF165andtheeffectofVEGF165antibodyinanti-tumortherapy,therecombinantsec
6、retoryvectorofpPIC9K-VEGF165wasconstructed,linearizedandthentransformedintoPichiapastorisstrainGS115(his4)byelectroporation.ThepositivetransformantswereseperatedbyMDplatescreeningandconfirmedbyPCRreaction.Subsequently,therhVEGF165proteinwasobtainedbypurificationfromth
7、esupernatantwithSephadexG-25、HeparinSepharoseFFandSephacrylS-100gelfiltrationchromatographwithmolecularweightof24kDandpurityof95%,showingbySDS-PAGE.Furthermore,therecombinantproteinwasfoundtohavehighpotencyofinducingHUVECcellproliferationandimprovingHUVECcellactivity.
8、ThepolyclonalantibodygeneratedfromrhVEGF165immunizedmouseexertsthetiterof1:51200byindirectELISAanalysis.Thesuccessfulexpress
