沙門菌檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展

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1、沙門菌檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展冼桂江【摘要】近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)，免疫學(xué)技術(shù)及其他新的檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，沙門菌的檢測(cè)方法，打破了傳統(tǒng)分離培養(yǎng)的單一方法。木文對(duì)目前各種沙門菌的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的概述。【關(guān)鍵詞】沙門菌；檢測(cè)技術(shù)；進(jìn)展沙門菌在自然界中分布廣泛，是一種重要的人畜共患病原菌。不但能引起家畜、家禽及其他動(dòng)物發(fā)牛.感染，而且能通過(guò)污染食物導(dǎo)致人的食物中毒。在世界各國(guó)的各類細(xì)菌性食物中毒中，以沙門菌引起的在英國(guó)為首位，在美國(guó)為第二位。在歐洲，每年有超過(guò)16萬(wàn)人感染沙門菌【1】；在美國(guó)毎年有140萬(wàn)人感染沙門菌【2】；在我國(guó)，由沙門菌引起的食源

2、性食物中毒占首位或第二位【3】。生物學(xué)特性沙門菌屬腸桿菌科，革蘭染色陰性桿菌，適宜溫度為37°C.大多數(shù)沙門菌有菌體鞭毛能運(yùn)動(dòng)，菌體溶解時(shí)能產(chǎn)生內(nèi)毒素【4】。有些沙門菌含有耐藥因子，對(duì)某些抗生素產(chǎn)生耐藥作用。沙門菌菌型繁多，已確認(rèn)的沙門菌有2500個(gè)以上的血清型【5】。在我國(guó)己發(fā)現(xiàn)200多個(gè)菌型。引起人類疾病的主要有豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌、雞沙門菌和鴨沙門菌等10多個(gè)血清型。檢測(cè)方法1.國(guó)標(biāo)方法GB/T4789.4-2010是我國(guó)目前規(guī)定的食品中沙門菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法主要是根據(jù)沙門菌的特性，分五個(gè)步驟進(jìn)行，即前増菌

3、、選擇性増菌、選擇性平板分離、生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型鑒定。該方法檢測(cè)技術(shù)成木低，但檢驗(yàn)程序復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，一般要4-7d才能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。針對(duì)此方法的缺點(diǎn)，有研究者對(duì)其進(jìn)行了改良，比較常用有以下三種：1.1添加物質(zhì)法由于沙門菌具有特異性地分解丙烯乙二醇產(chǎn)酸，使中性紅指示劑變紅的生化特性，在分離培養(yǎng)基中加入丙烯乙二醇，5-溴-4-氯-3為*

4、哚-D呋喃半乳糖，可對(duì)沙門菌的分離與鑒定同步進(jìn)行，使沙門菌檢測(cè)所需吋間從常規(guī)方法的4-7d縮短至2d【6】。1.2疏水網(wǎng)格濾膜法（HGMF）疏水網(wǎng)格濾膜法是利用濾膜的疏水性粘附細(xì)菌細(xì)胞，通過(guò)膜進(jìn)行選擇性地培

5、養(yǎng)，達(dá)到檢測(cè)鑒定0的菌的作用。疏水網(wǎng)格濾膜法對(duì)傳統(tǒng)檢測(cè)方法中的常規(guī)平板劃線做了改進(jìn)。樣品通過(guò)濾膜的過(guò)濾，濃縮了樣品中的細(xì)菌，除去了多余的生長(zhǎng)抑制物質(zhì)，使0的菌粘附在疏水網(wǎng)格濾膜的小格中，在疏水網(wǎng)格濾膜上傾入沙門菌選擇性培養(yǎng)基，培養(yǎng)后即可計(jì)數(shù)。該方法比國(guó)標(biāo)法操作簡(jiǎn)化，檢測(cè)時(shí)間可縮短至3d左右【7】。1.3顯色培養(yǎng)法顯色培養(yǎng)法是在培養(yǎng)基中加入沙門菌某些特異性酶的底物，該底物通常為無(wú)色，經(jīng)特異性酶作用而顯現(xiàn)一定的顏色，便于可疑沙門菌的識(shí)別【8】。顯色培養(yǎng)法使用方便，操作簡(jiǎn)單，可大大縮短檢測(cè)時(shí)間，能滿足應(yīng)急或基層單位檢測(cè)的需要，但成本較高，很難普及

6、使用。1.免疫學(xué)檢測(cè)法利用抗原抗體的反應(yīng)特性，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒別和定型。沙門菌免疫學(xué)檢測(cè)方法大致可分為：酶聯(lián)免疫吸附（EUSA）法、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附（Dot-EUSA）法、熒光抗體染色（免疫熒光）法、自動(dòng)酶標(biāo)免疫檢測(cè)儀、免疫磁性分離法等。2.1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（EUSA）Kryinski與Heimsch1977年首次將酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法用于食品沙門菌檢測(cè)。隨后有許多學(xué)者都利用EUSA法進(jìn)行食品沙門菌的檢測(cè)，但他們使用的多價(jià)血清不同程度地存在交叉反應(yīng)，使ELISA產(chǎn)生假陽(yáng)性，在實(shí)際工作中造成一定的困難。20世紀(jì)80年代，.單克隆抗體技術(shù)問世并日

7、趨成熟，建立了沙門菌各種o抗原、H抗原的單抗，取代了常規(guī)因子血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定、傷寒診斷、雞白痢檢疫，并顯示出單抗卓越的性能。王志亮等應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)獲得了4株具有沙門菌廣譜結(jié)合特性的單克隆抗體，其中2株的反應(yīng)互補(bǔ)，對(duì)已檢菌株覆蓋率達(dá)99%,而對(duì)艽他受試腸桿菌均無(wú)交叉反應(yīng)。文其乙等在前人的基礎(chǔ)上應(yīng)用沙門菌屬特異性單克隆抗體CB8和de7建立了檢測(cè)沙門菌的直接EUSA方法，并形成了快速檢測(cè)試劑盒，它能檢出肉類樣品中至少5cfu/25g，并在48h內(nèi)得出結(jié)果，最低檢出量為106cfu/ml,特異性和靈敏性分別為100%和99%【9】。黃素

8、珍等采用篩選強(qiáng)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制備了高效價(jià)的3-47-26單克隆抗體，建立了檢測(cè)腸炎沙門菌的抗原競(jìng)爭(zhēng)EUSA方法，利用樣品中的Lps抑制酶標(biāo)抗體與包被的Lps結(jié)合，以降低底物反應(yīng)的顏色，從而達(dá)到檢測(cè)的0的【10-12】。通過(guò)單克隆抗體大大降低了假陽(yáng)性率，使ELISA法得以在基層逐漸推廣。2.2斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附（Dot-ELISA）方法斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是以微孔濾膜為固相載體的一項(xiàng)免疫酶技術(shù)，具奮簡(jiǎn)單、快速、敏感、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，并具有較高的可重復(fù)性，比國(guó)標(biāo)分離培養(yǎng)方法縮短3_4d，而且陽(yáng)性反應(yīng)色斑易于觀察，陽(yáng)性檢出率也高于常規(guī)方法。應(yīng)用該

9、方法檢測(cè)食品中沙門菌的報(bào)道很多。蔡家利等應(yīng)用Dot-ELISA檢測(cè)屠宰加工肉品中沙門菌，與常規(guī)檢測(cè)法對(duì)200份樣品對(duì)比檢驗(yàn)，該法檢出結(jié)果符合率為96.65%【13-14】；張紅見