沙門菌檢測技術(shù)的進(jìn)展

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1、沙門菌檢測技術(shù)的進(jìn)展冼桂江【摘要】近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)，免疫學(xué)技術(shù)及其他新的檢測技術(shù)的應(yīng)用，沙門菌的檢測方法，打破了傳統(tǒng)分離培養(yǎng)的單一方法。木文對目前各種沙門菌的檢測技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的概述?！娟P(guān)鍵詞】沙門菌；檢測技術(shù)；進(jìn)展沙門菌在自然界中分布廣泛，是一種重要的人畜共患病原菌。不但能引起家畜、家禽及其他動物發(fā)牛.感染，而且能通過污染食物導(dǎo)致人的食物中毒。在世界各國的各類細(xì)菌性食物中毒中，以沙門菌引起的在英國為首位，在美國為第二位。在歐洲，每年有超過16萬人感染沙門菌【1】；在美國毎年有140萬人感染沙門菌【2】；在我國，由沙門菌引起的食源

2、性食物中毒占首位或第二位【3】。生物學(xué)特性沙門菌屬腸桿菌科，革蘭染色陰性桿菌，適宜溫度為37°C.大多數(shù)沙門菌有菌體鞭毛能運(yùn)動，菌體溶解時(shí)能產(chǎn)生內(nèi)毒素【4】。有些沙門菌含有耐藥因子，對某些抗生素產(chǎn)生耐藥作用。沙門菌菌型繁多，已確認(rèn)的沙門菌有2500個(gè)以上的血清型【5】。在我國己發(fā)現(xiàn)200多個(gè)菌型。引起人類疾病的主要有豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌、雞沙門菌和鴨沙門菌等10多個(gè)血清型。檢測方法1.國標(biāo)方法GB/T4789.4-2010是我國目前規(guī)定的食品中沙門菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。該檢測方法主要是根據(jù)沙門菌的特性，分五個(gè)步驟進(jìn)行，即前増菌

3、、選擇性増菌、選擇性平板分離、生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型鑒定。該方法檢測技術(shù)成木低，但檢驗(yàn)程序復(fù)雜，耗時(shí)長，一般要4-7d才能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。針對此方法的缺點(diǎn)，有研究者對其進(jìn)行了改良，比較常用有以下三種：1.1添加物質(zhì)法由于沙門菌具有特異性地分解丙烯乙二醇產(chǎn)酸，使中性紅指示劑變紅的生化特性，在分離培養(yǎng)基中加入丙烯乙二醇，5-溴-4-氯-3為*

4、哚-D呋喃半乳糖，可對沙門菌的分離與鑒定同步進(jìn)行，使沙門菌檢測所需吋間從常規(guī)方法的4-7d縮短至2d【6】。1.2疏水網(wǎng)格濾膜法（HGMF）疏水網(wǎng)格濾膜法是利用濾膜的疏水性粘附細(xì)菌細(xì)胞，通過膜進(jìn)行選擇性地培

5、養(yǎng)，達(dá)到檢測鑒定0的菌的作用。疏水網(wǎng)格濾膜法對傳統(tǒng)檢測方法中的常規(guī)平板劃線做了改進(jìn)。樣品通過濾膜的過濾，濃縮了樣品中的細(xì)菌，除去了多余的生長抑制物質(zhì)，使0的菌粘附在疏水網(wǎng)格濾膜的小格中，在疏水網(wǎng)格濾膜上傾入沙門菌選擇性培養(yǎng)基，培養(yǎng)后即可計(jì)數(shù)。該方法比國標(biāo)法操作簡化，檢測時(shí)間可縮短至3d左右【7】。1.3顯色培養(yǎng)法顯色培養(yǎng)法是在培養(yǎng)基中加入沙門菌某些特異性酶的底物，該底物通常為無色，經(jīng)特異性酶作用而顯現(xiàn)一定的顏色，便于可疑沙門菌的識別【8】。顯色培養(yǎng)法使用方便，操作簡單，可大大縮短檢測時(shí)間，能滿足應(yīng)急或基層單位檢測的需要，但成本較高，很難普及

6、使用。1.免疫學(xué)檢測法利用抗原抗體的反應(yīng)特性，對細(xì)菌進(jìn)行鑒別和定型。沙門菌免疫學(xué)檢測方法大致可分為：酶聯(lián)免疫吸附（EUSA）法、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附（Dot-EUSA）法、熒光抗體染色（免疫熒光）法、自動酶標(biāo)免疫檢測儀、免疫磁性分離法等。2.1酶聯(lián)免疫吸附測定法（EUSA）Kryinski與Heimsch1977年首次將酶聯(lián)免疫吸附測定法用于食品沙門菌檢測。隨后有許多學(xué)者都利用EUSA法進(jìn)行食品沙門菌的檢測，但他們使用的多價(jià)血清不同程度地存在交叉反應(yīng)，使ELISA產(chǎn)生假陽性，在實(shí)際工作中造成一定的困難。20世紀(jì)80年代，.單克隆抗體技術(shù)問世并日

7、趨成熟，建立了沙門菌各種o抗原、H抗原的單抗，取代了常規(guī)因子血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定、傷寒診斷、雞白痢檢疫，并顯示出單抗卓越的性能。王志亮等應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)獲得了4株具有沙門菌廣譜結(jié)合特性的單克隆抗體，其中2株的反應(yīng)互補(bǔ)，對已檢菌株覆蓋率達(dá)99%,而對艽他受試腸桿菌均無交叉反應(yīng)。文其乙等在前人的基礎(chǔ)上應(yīng)用沙門菌屬特異性單克隆抗體CB8和de7建立了檢測沙門菌的直接EUSA方法，并形成了快速檢測試劑盒，它能檢出肉類樣品中至少5cfu/25g，并在48h內(nèi)得出結(jié)果，最低檢出量為106cfu/ml,特異性和靈敏性分別為100%和99%【9】。黃素

8、珍等采用篩選強(qiáng)陽性雜交瘤細(xì)胞株制備了高效價(jià)的3-47-26單克隆抗體，建立了檢測腸炎沙門菌的抗原競爭EUSA方法，利用樣品中的Lps抑制酶標(biāo)抗體與包被的Lps結(jié)合，以降低底物反應(yīng)的顏色，從而達(dá)到檢測的0的【10-12】。通過單克隆抗體大大降低了假陽性率，使ELISA法得以在基層逐漸推廣。2.2斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附（Dot-ELISA）方法斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是以微孔濾膜為固相載體的一項(xiàng)免疫酶技術(shù)，具奮簡單、快速、敏感、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，并具有較高的可重復(fù)性，比國標(biāo)分離培養(yǎng)方法縮短3_4d，而且陽性反應(yīng)色斑易于觀察，陽性檢出率也高于常規(guī)方法。應(yīng)用該

9、方法檢測食品中沙門菌的報(bào)道很多。蔡家利等應(yīng)用Dot-ELISA檢測屠宰加工肉品中沙門菌，與常規(guī)檢測法對200份樣品對比檢驗(yàn)，該法檢出結(jié)果符合率為96.65%【13-14】；張紅見