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《H1N1亞型豬流感病毒HA和NA基因雙重RT-PCR定型檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)2014，22(4)：29·34ChineseJournalofAnima1InfectiOUSDiseases·研究論文·H1N1亞型豬流感病毒HA和NA基因雙重RT-PCR定型檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用溫肖會(huì)，蔡春梅，魏文康，翟少倫，呂殿紅，賈春玲，袁潔，黃忠，周秀蓉(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所。廣州510640)摘要：為了建立適用于臨床診斷的H1N1亞型豬流感病毒快速檢測(cè)方法，本研究根據(jù)GenBank已登錄的H1N1皿型豬流感病毒HA和NA基因序列設(shè)計(jì)RT-PCR擴(kuò)增引物，
2、以H1N1亞型豬流感病毒、H3N2亞型豬流感病毒、豬瘟病毒和豬學(xué)殖與呼吸綜合征病毒為試驗(yàn)對(duì)照，通過(guò)優(yōu)化RT-PCR反應(yīng)條件和反應(yīng)體系，建立了H1NI亞型豬流感病毒HA和NA基因雙RT-PCR定型檢測(cè)方法。同時(shí)，運(yùn)用H1Nl亞型豬流感病毒血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法和本研究建立的方法對(duì)165份豬病料樣品進(jìn)行了對(duì)比驗(yàn)證。結(jié)果表明，本研究建立的H1N1亞型豬流感病毒雙重RT-PCR具有良好的特異性、敏感性、重復(fù)性，所擴(kuò)埋的目的基因片段大小分別為428bp和678bp左右，可檢出最小基因組RNA濃度為2．9×
3、10一g／L。本研究建立的方法和tI1N1亞型豬流感病毒血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法均從同一份豬肺臟樣品中檢測(cè)出H1N1亞型豬流感病毒，其余樣品中均未檢出ttlN1亞型豬流感病毒，兩種方法符合率為100％。本研究建立的方法適用于H1N1亞型豬流感病毒雙基因定型檢測(cè)，可在H1NI亞型豬流感病毒流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷中應(yīng)用。關(guān)鍵詞：HINI亞型豬流感；雙重RT-PCR方法；HA基因；NA基因中圖分類(lèi)號(hào)：$852．659．5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1674．6422(2014)04—0029．06DoUBL
4、ERT-PCRMETHoDSFoRDETECTIoNoFHAANDNAGE_ESoFH1N1SUBTYPESWINEINFLUENZAVIRUSWENXiao—hui，CAIChun—mei，WEIWen—kang，ZHAIShao—lun，LVDian—hong，JIAChun—ling，YUANJie，HUANGZhong，ZHOUXiu—rongrInstituteofAnimalHealth，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences，Guangdong
5、51064~China)Abstract：TodevelopareliablediagnosticmethodforH1N1subtypeSwineinfluenzavirus．doubleRT-PCRmethodsW：redevelopedusingprimersdesignedaccordingtothesequencesofHAandNAgenesofH1N1SubtypeswineinfluenzavirusinGenBank．Theamplifiedgenefragmentswere4
6、28bpforHAand678bpforNA．ThereactionconditionswereoptimizedandminimaldetectableRNAconcentrationwas2．9x1O。LJMeanwhile，themethodhadnoreactionwithH3N2subtypeSwineinfluenzavirus，classicalSwinefevervirusandPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus．This
7、methoddevelopedhereissuitablefordoubl：genetypingdetectionandalsoforearlydiagnosisandepidemiologicalinvestigationofH1NIsubtypeSwineinfluenzavirus．Keywords：H1N1subtypeSwineinfluenzavirus；doubleRT-PCR；HAgene；NAgene收稿日期：2013—12-2[)基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(2010
8、B080701024)；廣東省科技計(jì)劃特定任務(wù)項(xiàng)目(2011B06070()075)；廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012224—26)作者簡(jiǎn)介：溫肖會(huì)，女，碩士，助理研究員，主要從事動(dòng)物疫病診斷和動(dòng)物傳染病學(xué)研究通信作者：魏文康，E—mail：wwk188@tom．com中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)2014年8月流感病毒(Influenzavirus，IV)屬于正粘病1．1．2主要試劑和工具酶一步法反轉(zhuǎn)錄RT—PCR試劑毒科(Orthomyxoviridae)、流感病毒屬，根據(jù)核盒、DNAMarker(DL20
