《基因克隆載體》PPT課件

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1、第三章基因克隆載體第三節(jié)染色體定位整合克隆載體質(zhì)粒與病毒克隆載體的不足：1、外源DNA的不穩(wěn)定性2、外源DNA插入染色體DNA位點(diǎn)的隨機(jī)性基因整合平臺(tái)系統(tǒng)——基因定位同源重組(基因打靶)整合平臺(tái)：即受體細(xì)胞基因組上給定的DNA區(qū)域，是外源DNA定位整合的位置定位整合克隆載體：除一般質(zhì)?？寺≥d體必備的元件外，還含有一個(gè)或兩個(gè)與整合平臺(tái)DNA區(qū)域核酸序列同源的DNA片段（長(zhǎng)度最好＞1kb）一、定位整合克隆載體的幾種模式（一）內(nèi)源平臺(tái)雙交換置換克隆載體（二）外源平臺(tái)雙交換置換克隆載體（三）內(nèi)源平臺(tái)雙交換插入克隆載體（四）內(nèi)源平臺(tái)單交換插入克隆載體二、定位整合效

2、率與受體細(xì)胞的種屬和同源DNA片段的長(zhǎng)短有關(guān)整合效率偏低，有待改進(jìn)三、定位整合克隆載體受體生物：原核生物藍(lán)細(xì)菌、高等植物（擬南芥、水稻等）的原生質(zhì)體、動(dòng)物鼠的胚胎干細(xì)胞、人的細(xì)胞整合平臺(tái)：內(nèi)源isiAB、cpcB2A2、hprt、rDNA外源hptΔ、aphⅡ（一）藍(lán)藻染色體定位整合克隆載體1、絲狀藍(lán)藻Calothrixsp.PCC7601獲得含藻藍(lán)蛋白基因cpcB2A2的DNA片段，以之為同源序列，構(gòu)建～2、從其cpc2操縱子中擴(kuò)贈(zèng)出cpc2啟動(dòng)區(qū)（約0.6kb）、同源DNA片段L（約1.2kb）和R（約1.15kb）構(gòu)建如下載體：3、Synechoc

3、occus從sp.PCC7942獲得含isiAB基因的約1.5kb的DNA片段，構(gòu)建pZL：不含藍(lán)藻源質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)，故不能在藍(lán)藻細(xì)胞質(zhì)中自行復(fù)制（二）酵母菌染色體定位整合克隆載體（三）植物染色體定位整合克隆載體易于控制；避免插入失活或突變。（四）動(dòng)物染色體定位整合克隆載體第四節(jié)人工染色體克隆載體一、人工染色體克隆載體含義和特點(diǎn)“穿梭”克隆載體：含有質(zhì)?？寺≥d體所必備的第一受體（大腸桿菌）源質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)（ori），還含有第二受體（如酵母菌）染色體DNA著絲點(diǎn)、端粒和復(fù)制起始位點(diǎn)的序列，以及合適的選擇標(biāo)記基因。特點(diǎn)：能容納長(zhǎng)達(dá)1000至3000kb的

4、外源DNA片段。二、人工染色體克隆載體的構(gòu)建YAC（酵母人工染色體）常用載體：pYAC3、pYAC4、pYAC5三、人工染色體克隆載體的應(yīng)用構(gòu)建基因組文庫(kù)基因治療基因功能鑒定作業(yè)列舉所學(xué)的幾種重要克隆載體的定義。各種載體的特點(diǎn)是什么？列舉質(zhì)粒和噬菌體克隆載體構(gòu)建的基本策略。簡(jiǎn)述使用cosmid載體的基本程序。